थ्व च्वसु “फलफूलया रोगजनक व कीट प्रतिरोधात्मक क्षमता अप्वयेकेगु” अनुसन्धान विषयया छगू ब्व खः, फुक्क ५ गू च्वसु स्वयादिसँ
फंगल वनस्पति ल्वेया नेक्रोसिस स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम (लिब.) डी ब्यारीं थी-थी होस्ट वनस्पतियात संक्रमित यायेत बहुस्तरीय रणनीति छ्येलि। थ्व अध्ययनं मेमेगु आवश्यक एमिनो एसिडया संश्लेषणयात उत्तेजित याइगु गैर-प्रोटिन एमिनो एसिड डायमिन एल-ओर्निथिनयात वैकल्पिक व्यवस्थापन रणनीतिया रुपय् छ्येलेगु प्रस्ताव याःगु दु गुकिलिं Pseuler vulgaris L. इन् भिट्रो प्रयोगं क्यंगु दु कि एल-ओर्निथिनं एस पाइरेनोइडोसाया माइसेलियल वृद्धियात खुराक-निर्भर कथं उल्लेखनीय रुपं नियन्त्रण याइ। थ्वयां अप्वः, थुकिं ग्रीनहाउसया अवस्थाय् तुयुगु फोहरया गम्भीरतायात यक्व हे म्ह्व यायेफु । थ्व बाहेक एल-ओर्निथिनं उपचारित वनस्पतिया वृद्धियात उत्तेजित याइ, गुकिलिं एल-ओर्निथिनया परीक्षण यानातःगु एकाग्रता उपचारित वनस्पतिया निंतिं फाइटोटक्सिक मजूगु संकेत बी। थ्व नापं, एल-ओर्निथिनं गैर-एन्जाइमेटिक एन्टिअक्सिडेन्ट (कुल घुलनशील फेनोलिक व फ्लेभोनोइद) व एन्जाइमेटिक एन्टिअक्सिडेन्ट (कैटालेज (CAT), पेरोक्सिडेज (POX), व पोलिफेनोल अक्सिडेज (PPO))या अभिव्यक्ति अप्वयेकल, व स्वंगु एन्टिअक्सिडेन्ट-सम्बन्धी जीन, PGRv1C, व PvSOAT)या अभिव्यक्ति अप्वयेकल। थ्व बाहेक, इन सिलिको विश्लेषणं एस स्क्लेरोटिओरम जीनोमय् छगू पुटेटिभ ओक्सालोएसिटेट एसिटाइलहाइड्रोलेज (SsOAH) प्रोटिनया उपस्थिति खने दु, गुगु एस्परजिलस (SsAcilliAH) filof या ओक्सालोएसिटेट एसिटाइलहाइड्रोलेज (SsAH) प्रोटिनलिसे तसकं ज्वःलाः । (PlOAH) क्रियाशील विश्लेषण, संरक्षित डोमेन, व टोपोलोजीया सन्दर्भय्। रोचक खँ छु धाःसा आलु डेक्सट्रोज ब्रुथ (पीडीबी) माध्यमय् एल-ओर्निथिन तनेवं एस स्क्लेरोटिओरम माइसेलियाय् एसएसओएएच जीनया अभिव्यक्ति यक्व म्हो जुल। अथे हे एल-ओर्निथिनया एक्सोजेनस छ्येलेज्यां उपचारित वनस्पतिं संकलन याःगु फंगल माइसेलियाय् SsOAH जीनया अभिव्यक्ति यक्व म्हो जुल। अन्तय्, एल-ओर्निथिन छ्यलेबलय् पीडीबी माध्यम व संक्रमित पत्तिइ निगुलिं अक्सालिक एसिड स्रावय् उल्लेखनीय रुपं म्हो जुल। निष्कर्षय्, एल-ओर्निथिनं रेडक्स स्थिति कायम यायेगु नापं संक्रमित वनस्पतिया प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया अप्वयेकेगुलि मू भूमिका म्हिती। थ्व अध्ययनया लिच्वःं ह्याउँगु फोहरयात नियन्त्रण यायेत व सिमि उत्पादन व मेमेगु बालीइ थुकिया लिच्वःयात म्हो यायेत अभिनव, वातावरण मैत्री विधि विकास यायेत ग्वाहालि जुइफु ।
नेक्रोट्रोफिक फंगस स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम (लिब.) डी बेरीया कारणं जुइगु ह्याउँगु फोहर छगू विनाशकारी, उत्पादन म्हो याइगु ल्वे ख गुकिलिं विश्वव्यापी सिमि (फेसिओलस भल्गारिस एल.) उत्पादनय् तच्वःगु खतरा ब्वलनी (बोल्टन एट अल, २००६)। स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम नियन्त्रण यायेत दकलय् थाकुगु बुँइ दूगु फंगल वनस्पतिया रोगजनकय् छगू ख, गुकिलि ६०० स्वया अप्व वनस्पति प्रजातिया व्यापक होस्ट रेन्ज दु व गैर-विशिष्ट कथं होस्ट टिस्यूयात याकनं म्यासेरेट यायेगु क्षमता दु (लिआङ व रोलिन्स, २०१८)। प्रतिकूल परिस्थितिइ थ्व थःगु जीवन चक्रया छगू महत्वपूर्ण चरणय् वनि, बुँइ 'स्क्लेरोटिया' धाःगु हाकुगु, कठोर, बीज थें न्याःगु संरचनाया रुपय् वा संक्रमित वनस्पतिया माइसेलियम वा स्टेम पिथय् ह्याउँगु, फ्लफी वृद्धिया रुपय् ताःईतक्क सुप्त अवस्थाय् च्वनि (alwartz,S.50). एस स्क्लेरोटिओरम स्क्लेरोटिया दयेकेगु सक्षम जुइ, गुकिलिं थ्व संक्रमित बुँइ ताः ई तक्क म्वानाच्वनि व ल्वेया इलय् नं दयाच्वनि (Schwartz et al., 2005)। स्क्लेरोटियाय् पोषक तत्त्व यक्व दइ, ताः ई तक्क बुँइ दयाच्वनेफु, व लिपाया संक्रमणया निंतिं प्राथमिक इनोकुलमया रुपय् ज्या याइ (Schwartz et al., 2005)। अनुकूल परिस्थितिइ स्क्लेरोटिया अंकुरित जुइ व वायुमण्डलय् बीजाणु दयेकि गुकिलिं वनस्पतिया भूमिया च्वय् च्वंगु फुक्क भागय् संक्रमण यायेफु, गुकिलि स्वां, तना वा फल नं ला (Schwartz et al., 2005)।
स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरमं थःगु होस्ट वनस्पतियात संक्रमित यायेत बहुस्तरीय रणनीति छ्येलि, गुकिलि स्क्लेरोटिया अंकुरण निसें लक्षण विकास तक्कया समन्वयात्मक घटनाया श्रृंखला दुथ्याइ। न्हापा न्हापा एस स्क्लेरोटिओरमं एपोथेसिया धाःगु च्याउ थें न्याःगु संरचनां निलम्बित बीजाणु (एस्कोस्पोर धाइगु) दयेकिगु या, गुकिलिं वायुमण्डलय् जुइ व संक्रमित वनस्पतिया मलमूत्रय् गैर-गतिशील स्क्लेरोटियाया रुपय् विकास जुइ (बोल्टन एट अल, २००६)। अनंलि फंगसं वनस्पति कोष पःखाःया पीएचयात नियन्त्रण यायेत, एन्जाइमेटिक अपघटन व टिसु आक्रमणयात प्रोत्साहन बीत, व होस्ट वनस्पतिया अक्सिडेटिभ बर्स्टयात दमन यायेत, छगू ​​विषाणु कारक अक्सालिक एसिड पिकाइ। थ्व अम्लीकरण प्रक्रियां वनस्पति कोष पःखाःयात कमजोर याइ, गुकिलिं फंगल कोष पःखाः अपघटन याइगु एन्जाइम (CWDEs)या सामान्य व दक्ष संचालनया निंतिं अनुकूल वातावरण दयेकी, गुकिलिं रोगजनकयात भौतिक बाधायात पार यायेत व होस्ट टिसुइ दुहां वनेत अनुमति बी (मार्सियानो एट अल, १९८३)। छकः दुहां वनेधुंका एस स्क्लेरोटिओरमं यक्व सीडब्लुडीई, दसु पोलिग्यालाक्टुरोनेज व सेल्युलेज पिकाइ, गुकिलिं संक्रमित टिसुइ थुकिया प्रसार यायेत अःपुइ व टिसु नेक्रोसिस जुइ। घाः व हाइफल म्याटया प्रगतिं ह्याउँगु फोहरया विशेषता लक्षण खनेदइ (हेगेडस व रिमर, २००५)। अथेहे, होस्ट वनस्पतितेसं प्याटर्न म्हसीका रिसेप्तर (पीआरआर)या माध्यमं प्याथोजेन-सम्बन्धी आणविक प्याटर्न (पीएएमपी) म्हसीकिगु या, गुकिलिं सिग्नलिङ घटनाया श्रृंखलायात ट्रिगर याइ गुकिलिं अन्ततः प्रतिरक्षा प्रतिक्रियायात सक्रिय याइ।
दशकौंया ल्वे नियन्त्रणया कुतःया बाबजुद, मेमेगु व्यावसायिक बालीइ थें, स्याउलय् नं पर्याप्त प्रतिरोधी जर्मप्लाज्मया अभाव दयाच्वंगु दु, छाय् धाःसा रोगजनकया प्रतिरोध, अस्तित्व व अनुकूलनशीलता दु। अतः, ल्वे व्यवस्थापन अत्यन्त चुनौतीपूर्ण ख व छगू एकीकृत, बहुआयामिक रणनीति माः गुकिलि सांस्कृतिक अभ्यास, जैविक नियन्त्रण, व रासायनिक फंगिसाइडया संयोजन दुथ्याइ (ओ'सुलिभन एट अल, २०२१)। ह्याउँगु फोहरया रासायनिक नियन्त्रण दकलय् प्रभावकारी जुइ छाय् धाःसा फंगिसाइडयात सही ढंगं व पाय्छि इलय् छ्यलेबलय् ल्वय् न्यनेगुयात प्रभावकारी रुपं नियन्त्रण यायेफइ, संक्रमणया गम्भीरता म्हो जुइ, अले उत्पादनया क्षति म्हो जुइ । तर फंगिसाइडया अप्व छ्येलेज्या व अप्व निर्भरतां एस स्क्लेरोटिओरमया प्रतिरोधी प्रजातिया उदय जुइफु व गैर-लक्षित जीव, बुँया स्वास्थ्य, व लःया गुणस्तरय् नकारात्मक लिच्वः लाकी (ले कोइन्टे व मेमेपिं, २०१६; सेरेसिनी व मेमेपिं, २०२४)। उकिं वातावरण मैत्री विकल्प मालेगु ज्या शीर्ष प्राथमिकताय् लाःगु दु ।
पोलियामिन (पीए), गथेकि पुट्रेसिन, स्पर्मिडिन, स्पर्मिन, व क्याडाभरिन, बुँइ दयाच्वंगु वनस्पतिया रोगजनक विरुद्ध आशाजनक विकल्पया रुपय् ज्या यायेफु, गुकिलिं हानिकारक रासायनिक फंगिसाइडया छ्येलेज्या पूर्ण वा आंशिक रुपं म्हो जुइ (नेहेला व मेमेपिं, २०२४; यी२०, २४)। उच्च वनस्पतिइ पीए यक्व शारीरिक प्रक्रियाय् संलग्न जुइ गुकिलि कोष विभाजन, विभेदन, व अजैविक व जैविक तनावया प्रतिक्रिया नं ला (किलिनी व नेहेला, २०२०)। इमिसं एन्टिअक्सिडेन्टया रुपय् ज्या यायेफु, रिएक्टिभ अक्सिजन स्पेसिज (आरओएस)यात स्केभेन्ज यायेत ग्वाहालि यायेफु, रेडक्स होमियोस्टेसिस कायम यायेफु (नेहेला व किलिनी, २०२३), प्रतिरक्षा सम्बन्धी जीनयात प्रेरित यायेफु (रोमेरो एट अल, २०१८), थीथी मेटाबोलिक लँपुयात नियन्त्रित यायेफु (नेहेला व किलिनी, २० किलिनी, २०१९), प्रणालीगत अधिग्रहित प्रतिरोध (एसएआर) स्थापित यायेगु, व वनस्पति-रोगजनक अन्तरक्रियायात नियन्त्रित यायेगु (नेहेला व किलिनी, २०२०; असिजा एट अल, २०२२; जेर्वोनिएक, २०२२)। थ्व खँ लुमंकेबहःजू कि वनस्पति प्रतिरक्षाय् पीएया विशिष्ट संयन्त्र व भूमिका वनस्पति प्रजाति, रोगजनक, व वातावरणीय अवस्थाया आधारय् फरक जुइ। वनस्पतिइ दकलय् अप्व दूगु पीए आवश्यक पोलिअमिन एल-ओर्निथिनं बायोसिन्थेसिस जुइ (किलिनी व नेहेला, २०२०)।
एल-ओर्निथिनं स्वांसिमा बुयावइगु व विकास यायेगु ज्याय् यक्वं भूमिका म्हिती । दसुया निंतिं, न्हापाया अध्ययनं क्यंगु दु कि चा (Oryza sativa)य् ओर्निथिन नाइट्रोजन रिसाइक्लिङ (लिउ व मेमेपिं, २०१८), चाया उत्पादन, गुणस्तर व सुगन्ध (लु व मेमेपिं, २०२०), व लःया तनाव प्रतिक्रिया (याङ व मेमेपिं, २०००) नाप स्वापू दयेफु। अझ, एल-ओर्निथिनया एक्सोजेनस अनुप्रयोगं चिनी चुकन्दर (बीटा भल्गारिस) (हुसेन एट अल, २०१९) य् सुख्खा सहिष्णुताय् उल्लेखनीय वृद्धि यात व प्याज (एलियम सेपा) (Çavuşoǧlu व Çavuşoǧdadium occidental10wlu, २०१९) य् चिकंया तनाव म्हो यात। रोचा व अन्य, २०१२)। अजैविक तनाव प्रतिरक्षाय् एल-ओर्निथिनया सम्भावित भूमिका उपचारित वनस्पतिइ प्रोलिन संचयय् थुकिया संलग्नताया कारणं जुइफु। दसुया निंतिं, प्रोलिन मेटाबोलिज्मनाप स्वापू दूगु जीन, गथेकि ओर्निथिन डेल्टा एमिनोट्रान्सफेरेज (डेल्टा-ओएटी) व प्रोलिन डिहाइड्रोजेनेज (प्रोडीएच१ व प्रोडीएच२) जीन, थ्व स्वया न्ह्यः निकोटियाना बेन्थानेस्मियाना व अरबिडोप्सिस थालियानाया गैर-होस्ट एसिडोहिलोनाइन (पसेलु व मैसूर, २०१२)। मेखे, फंगल ओर्निथिन डिकार्बोक्सिलेज (ओडीसी) रोगजनकया वृद्धिया निंतिं माः (सिंह व मेमेपिं, २०२०)। फुसेरियम अक्सिस्पोरम एफया ओडिसियात लक्षित यायेगु । एसपि. होस्ट-प्रेरित जीन साइलेन्सिङ (एचआईजीएस) मार्फत लाइकोपर्सिसीं गोलभ्याराया वनस्पतिया फुसेरियम विल्ट प्रतिरोधात्मक क्षमता यक्व अप्वयेकल (सिंह एट अल, २०२०)। तर फाइटोप्याथोजेन थें न्याःगु बायोटिक तनाव विरुद्ध एक्सोजेनस ओर्निथिनया छ्येलेज्याया सम्भावित भूमिकाया बांलाक्क अध्ययन मजूनि। थ्व स्वया नं महत्त्वपूर्ण खँ छु धाःसा ल्वे प्रतिरोधात्मक क्षमता व व नाप स्वापू दूगु जैव रासायनिक व शारीरिक घटनाय् ओर्निथिनया प्रभाव यक्व ल्याखय् अन्वेषण मजूनि।
फलफूलया एस स्क्लेरोटिओरम संक्रमणया जटिलता थुइकेगु प्रभावकारी नियन्त्रण रणनीतिया विकासया निंतिं महत्वपूर्ण जुइ। थ्व अध्ययनय् जिमिसं स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम संक्रमणया प्रतिरक्षा संयन्त्र व फलफूलया वनस्पतिया प्रतिरोध क्षमता अप्वयेकेगु मू कारकया रुपय् डायमिन एल-ओर्निथिनया सम्भावित भूमिकायात म्हसीकेगु आज्जु तयागु खः । जिमिसं थ्व परिकल्पना याना कि, संक्रमित वनस्पतिया प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया अप्वयेकेगु नापं, एल-ओर्निथिनं रेडक्स स्थिति कायम यायेत नं मू भूमिका म्हिती। जिमिसं प्रस्ताव याना कि एल-ओर्निथिनया सम्भावित प्रभाव एन्जाइमेटिक व गैर-एन्जाइमेटिक एन्टिअक्सिडेन्ट प्रतिरक्षा संयन्त्रया नियमन व फंगल प्याथोजेनिसिटी/भाइरुलेन्स कारक व स्वापू दूगु प्रोटिनलिसे हस्तक्षेपलिसे स्वापू दु। एल-ओर्निथिनया थ्व दोहोरो कार्यक्षमतां थुकियात ह्याउँगु फोहरया प्रभावयात म्हो यायेगु व सामान्य फलफूलया बालीया थ्व शक्तिशाली फंगल रोगजनकया प्रतिरोधात्मक क्षमता अप्वयेकेगु दिगो रणनीतिया निंतिं छगू आशाजनक उम्मेदवार दयेकी। थुगु अध्ययनया लिच्वःं ह्याउँगु फोहरयात नियन्त्रण यायेत व थुकिया लिच्वःयात फलफूल उत्पादनय् म्हो यायेत अभिनव, वातावरण मैत्री विधिया विकासय् ग्वाहालि जुइफु ।
थ्व अध्ययनय् सामान्य सिसाबुसाया संवेदनशील व्यावसायिक जात गिजा ३ (फेसियोलस भल्गारिस एल. सीभी. गिजा ३)यात प्रयोगात्मक सामग्रीया रुपय् छ्यःगु ख। स्वस्थ बीज फलफूल अनुसन्धान विभाग, फील्ड क्रप्स रिसर्च इन्स्टिच्युट (एफसीआरआई), कृषि अनुसन्धान केन्द्र (एआरसी), इजिप्टं दया यानाः उपलब्ध याकूगु खः । प्लाष्टिकया गमलाय् (भित्री व्यास ३५ सेमि, गहिराइ ५० सेमि) ग्रीनहाउसया अवस्थाय् (२५ ± २ °C, सापेक्षिक आर्द्रता ७५ ± १%, ८ घण्टा जः/१६ घण्टा ख्युं) एस स्क्लेरोटिओरम संक्रमित बुँइ प्यंगू बीज बुइकूगु खः । बुइकेगु ७–१० न्हु लिपा (डीपीएस) बिरुवायात पातला यानाः छगू हे कथंया वृद्धि दुगु निगू बिरुवा व प्रत्येक गमलाय् स्वंगू पूर्ण रुपं विस्तारित हः जक त्वःताः । फुक्कं गमलाय् तयातःगु वनस्पतियात निवाःया छक्वः लः बियाः बियातःगु जातया निंतिं सिफारिस यानातःगु दरं मासिक निषेचन याःगु खः ।
एल-ओर्निथिनडायमिन ((+)-(S)-२,५-डायमिनोपेन्टानोइक एसिड; सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्ट्याड, जर्मनी)या ५०० एमजी/एल एकाग्रता तयार यायेत दकलय् न्हापां ५० एमजी १०० एमएल स्टेरिइल डिस्टिल लःइ घुलनशील यानातःगु ख। अनंलि स्टक सोलुसनयात पातिल यानाः लिपाया प्रयोगय् छ्यल । संक्षेपय्, एल-ओर्निथिनया एकाग्रता (१२.५, २५, ५०, ७५, १००, व १२५ mg/L)या ६गु श्रृंखला इन भिट्रोय् परीक्षण याःगु ख। नापं, स्टेरिइल डिस्टिल्ड वाटरयात नेगेटिभ कन्ट्रोल (मॉक)या रुपय् छ्यःगु खःसा व्यावसायिक फंगिसाइड “रिजोलेक्स-टी” ५०% गीला जुइगु पाउडर (टोक्लोफोस-मिथाइल २०% + थिराम ३०%; केजेड-काफर एल जायत पेस्टिसाइड्स एण्ड केमिकल्स कम्पनी, काफ) सकरात्मक नियन्त्रणया रुपय् । व्यावसायिक फंगिसाइड “रिजोलेक्स-टी” यात ५ गू एकाग्रता (२, ४, ६, ८ व १० एमजी/एल)य् इन भिट्रोय् परीक्षण याःगु खः ।
व्यावसायिक फार्मं ह्याउँगु फोहरया विशिष्ट लक्षण (संक्रमण दर : १०–३०%) क्यनाच्वंगु सामान्य सिमिया तना व फलया नमूना संकलन याःगु खः । संक्रमित वनस्पति सामग्रीया अप्वः धइथें प्रजाति/जात (संवेदनशील व्यावसायिक जात गिजा ३) कथं म्हसीकूसां मेमेगु विशेष यानाः स्थानीय बजारं प्राप्त जूगु वनस्पति सामग्री अज्ञात प्रजातिया खः । संकलन जूगु संक्रमित पदार्थयात न्हापां ०.५% सोडियम हाइपोक्लोराइट द्रावणं ३ मिनेटया निंतिं सतहय् कीटाणुनाशक यानाः स्टेरिइल डिस्टिल्ड लः तयाः तःक्वःमछि त्वपुयाः स्टेरिइल फिल्टर पेपरं सुख्खा यानाः अतिरिक्त लः लिकायेगु ज्या याःगु खः । अनंलि संक्रमित अंगयात दथुया टिश्यू (स्वस्थ व संक्रमित टिश्यूया दथुइ) चिचिधंगु टुक्राय् चीकाः आलु डेक्सट्रोज एगर (PDA) माध्यमय् संस्कार यानाः २५ ± २ °C य् १२ h लाइट/१२ h डार्क साइकलया नापं ५ न्हु तक इन्क्यूबेट यानाः स्क्लेरोटिया दयेकेगु ज्यायात उत्तेजित याःगु खः । मिश्रित वा दूषित संस्कृतिं फंगल आइसोलेटयात शुद्ध यायेत माइसेलियल टिप विधि नं छ्यःगु खः । शुद्धिकरण यानातःगु फंगल आइसोलेटयात दकलय् न्हापां थुकिया सांस्कृतिक आकारिकी विशेषताया आधारय् म्हसीका माइक्रोस्कोपिक विशेषताया आधारय् एस स्क्लेरोटिओरम जूगु पुष्टि याःगु खः । अन्तय्, कोचया पोस्टुलेट पूवंकेत सकल शुद्धिकरण आइसोलेटयात संवेदनशील सामान्य सिमि जात गिजा ३ य् रोगजनकया निंतिं परीक्षण याःगु ख।
थ्व नापं, दकलय् आक्रामक एस स्क्लेरोटिओरम आइसोलेट (आइसोलेट # ३)यात ह्वाइट एट अल, १९९० नं वर्णन यानातःगु कथं आन्तरिक ट्रान्सक्रिप्ट स्पेसर (आईटीएस) अनुक्रमणया आधारय् थप पुष्टि याःगु ख; बातुरो-सिएसनिव्स्का एट अल, २०१७ संक्षेपय्, आइसोलेटयात आलु डेक्सट्रोज ब्रुथ (पीडीबी)य् संस्कारित यानाः २५ ± २ °Cय् ५–७ न्हुया निंतिं इन्क्यूबेट यानातःगु खः । अनंलि फंगल माइसेलियम मुंकाः चीजक्लोथं फिल्टर यानाः निक्वः स्टेरिइल लः सिलाः स्टेरिइल फिल्टर पेपरं सुकाबिल । क्विक-डीएनए TM फंगल/ब्याक्टेरियल मिनिप्रेप किट (कुरामे-इजिओका, १९९७; अटल्लाह एट अल, २०२२, २०२४) छ्यला जेनोमिक डीएनए अलग याःगु ख। अनंलि आईटीएस आरडीएनए क्षेत्रयात विशिष्ट प्राइमर जोडी आईटीएस१/आईटीएस४ (टीसीसीजीटीएजीजीटीजीएएसीसीटीजीसीजीजी टीसीसीटीसीसीजीसीटीटीटीटीटीटीटीटीटीटीटीटीटीटीजीसी; अपेक्षित आकार: ५४० बीपी) ( बाटुरो-सिएसनिव्स्का एट अल।, २०१७ ) छ्यला एम्प्लिफाइ याःगु ख। शुद्धिकरण यानातःगु पीसीआर उत्पादनयात अनुक्रमणया निंतिं पेश याःगु खः (बेइजिङ आओके डिङसेङ बायोटेक्नोलोजी कम्पनी लिमिटेड) । आइटिएस आरडिएनए अनुक्रमयात स्याङ्गर अनुक्रमण विधि छ्यला द्विपक्षीय अनुक्रमित याःगु खः । अनंलि एसेम्बल यानातःगु क्वेरी सिक्वन्सयात ब्लास्टन सफ्टवेयर छ्यला जेनब्यांक व नेशनल सेन्टर फर बायोटेक्नोलोजी इन्फर्मेशन (एनसीबीआई, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) य् दुगु लिपांगु तथ्यांकलिसे तुलना याःगु खः । क्वेरी सिक्वन्सयात एनसीबीआई जेनबैंक (पूरक तालिका एस १) य् लिपांगु तथ्यांकं प्राप्त जूगु २० मेमेगु एस स्क्लेरोटिओरम स्ट्रेन/आइसोलेटलिसे तुलना याःगु खः गुकियात मोलेक्युलर इभोलुसनरी जेनेटिक्स एनालिसिस प्याकेज (मेगा-११; संस्करण ११) (कुमार एट अल, २०) य् क्लस्टलडब्लु छ्यला याःगु खः । विकासवादी विश्लेषण अधिकतम सम्भावना विधि व सामान्य ई-उल्टा जुइगु न्यूक्लियोटाइड प्रतिस्थापन मोडेल (नेइ व कुमार, २०००) छ्येला याःगु ख। दकलय् अप्वः लग-सम्भावना दुगु सिमा क्यनातःगु दु । हिउरिस्टिक मालेज्याया निंतिं प्रारम्भिक वृक्ष छिमेकी-जोइनिङ (एनजे) वृक्ष (कुमार एट अल, २०२४) व अधिकतम पारसीमोनी (एमपी) वृक्ष दथुइ अप्व लॉग-सम्भावना दूगु वृक्ष ल्यया ल्यइ। एनजे ट्री सामान्य ई-रिभर्सिबल मोडेल छ्यला गणना यानातःगु जोडीवार दूरी माट्रिक्स छ्यला दयेकूगु खः (नेइ व कुमार, २०००) ।
एल-ओर्निथिन व ब्याक्टेरियानाशक “रिजोलेक्स-टी”या एन्टिब्याक्टेरियल सक्रियता एगर डिफ्युजन विधिं इन भिट्रोय् निर्धारण याःगु ख। विधि : एल-ओर्निथिनया स्टक द्रावण (५०० एमजी/एल)या उचित मात्रा कयाः १० एमएल पीडीए पोषक तत्व माध्यमलिसे बांलाक ल्वाकछ्यानाः अन्तिम एकाग्रता क्रमशः १२.५, २५, ५०, ७५, १०० व १२५ एमजी/एलया द्रावण दयेकेगु । नियन्त्रणया रुपय् फंगिसाइड “रिजोलेक्स–टी” (२, ४, ६, ८ व १० एमजी/एल)या ५ गू एकाग्रता व स्टेरिइल डिस्टिल्ड वाटर छ्यःगु खः । माध्यम ठोस जुइधुंका स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम कल्चरया न्हुगु तयारी माइसेलियल प्लग, ४ मिमी व्यासया, पेट्री डिसया केन्द्रय् स्थानान्तरण याना २५±२°Cय् माइसेलियमं मुक्कं नियन्त्रण पेट्री डिसयात त्वपुइतले कल्चर यानातःगु ख, गुकिया लिपा फंगलया वृद्धि रेकर्ड यानातःगु ख। समीकरण १ छ्यलाः एस स्क्लेरोटिओरमया रेडियल वृद्धिया प्रतिशत निरोधया गणना या :
थ्व प्रयोग निक्व: दोहोरे जुल, प्रत्येक नियन्त्रण/प्रयोगात्मक पुचःया निंतिं ६गु जैविक प्रतिकृति व प्रत्येक जैविक प्रतिकृतिया निंतिं ५गु गमला (प्रति गमलाय् निगु वनस्पति)। प्रयोगात्मक लिच्वःया शुद्धता, विश्वसनीयता व पुनरुत्पादन योग्यता सुनिश्चित यायेत प्रत्येक जैविक प्रतिकृतियात निक्वः (निगू प्राविधिक प्रतिकृति) विश्लेषण याःगु खः । नापं, प्रोबिट रिग्रेसन विश्लेषणया छ्येला अर्ध-अधिकतम निरोधात्मक एकाग्रता (IC50) व IC99 (प्रेन्टिस, १९७६)या गणना याःगु ख।
ग्रीनहाउस अवस्थाय् एल-ओर्निथिनया सम्भावना मूल्यांकन यायेत लगातार निगू पोट प्रयोग याःगु खः । संक्षेपय्, गमलाय् स्टेरिलाइज्ड क्ले-स्यान्ड मा (३:१) तया एस स्क्लेरोटिओरमया ताजा तयार जूगु कल्चरं इनोक्यूलेसन यानातःगु ख। दकलय् न्हापां एस स्क्लेरोटिओरमया दकलय् आक्रामक आइसोलेट (आइसोलेट #३)यात छगू स्क्लेरोटियमयात निगू ब्वय् चीकाः, थुकियात पीडीएय् ख्वाः क्वय् तयाः २५° सेल्सियसय् निरन्तर खिउँथाय् (२४ घण्टा) ४ न्हु तक इन्क्यूबेट यानाः माइसेलियल वृद्धियात उत्तेजित यानाः कल्चर याःगु खः । अनंलि ५ एमएम व्यासया च्यागू एगर प्लगयात न्ह्यःनेया किनारापाखें कयाः १०० ग्राम ग्वा व चाया स्याःचाःया बाँझो मिश्रण (१:१, v/v) इनोक्यूलेसन यानाः फुक्क फ्लास्कयात २५ ± २ °C य् १२ h light/12 h dark stimulate daysler cycle अन्तर्गत sc ५ या निंतिं इन्क्यूबेट यानाः । चा तये न्ह्यः एकरुपता पक्का यायेत दक्वं फ्लास्कय् दुगु बांलाक ल्वाकछ्यानाबिल । अनंलि प्रत्येक क्वथाय् १०० ग्राम कोलोनाइजिंग ब्रान मिक्सचर तयाः रोगजनकया स्थिर एकाग्रता सुनिश्चित याःगु खः । फंगलया वृद्धियात सक्रिय यायेत इनोक्यूलेसन यानातःगु थलय् लः बियाः ७ न्हु तक ग्रीनहाउसया अवस्थाय् तयाबिल ।
अले प्रत्येक गमलाय् गिजा ३ जातया न्यागू पुसा बुइकल । एल-ओर्निथिन व फन्जिसाइड रिजोलेक्स-टीं उपचार यानातःगु गमलाया निंतिं स्टेरिलाइज्ड सियात न्हापां निगु यौगिकया जलीय द्रावणय् निघौतक थुनाबिल गुकिया अन्तिम IC99 एकाग्रता क्रमशः करिब २५० mg/L व ५० mg/L जुइ, व अनंलि छगू घण्टाया निंतिं एयर-ड्राइङ याये न्ह्यः सो । मेखे, नकारात्मक नियन्त्रणया रुपय् पुसायात स्टेरिइल डिस्टिल्ड लःया दुने थुनाबिल । १० न्हु लिपा न्हापां लः त्वंके न्ह्यः बिरुवायात पातला यानाः छगू छगू गमलाय् निगू सुचुकुचुगु बिरुवा जक ल्यं दत । थ्व नापं, एस स्क्लेरोटिओरमया संक्रमण सुनिश्चित यायेत, छगू ​​हे विकासात्मक चरणय् (१० न्हु) सिमि वनस्पतिया तनायात स्टेरिलाइज्ड स्क्याल्पेल छ्यला निगु थी-थी थासय् चीकाः प्रत्येक घालय् करिब ०.५ ग्राम कोलोनाइजिंग ब्रान मिक्सचर तया, वयां लिपा फुक्क घालय् विकास जूगु योजनाय् उच्च आर्द्रता तया उत्तेजित यानादिल। नियन्त्रण वनस्पतियात नं अथे हे घाःपाः यानाः उलि हे मात्राय् (०.५ ग्राम) बाँझो, अनकोलोनाइज्ड ब्रान मिश्रण घाःपाःय् तयाः उच्च आर्द्रताय् तयाः ल्वय् विकासया निंतिं वातावरणया अनुकरण यायेगु व उपचार पुचः दथुइ स्थिरता सुनिश्चित यायेगु ज्या याःगु खः ।
उपचार विधि : सिमिया बिरुवायात ५०० एमएल एल-ओर्निथिन (२५० एमजी/एल) वा फंगिसाइड रिजोलेक्स-टी (५० एमजी/एल)या जलीय द्रावणं बुँइ सिँचाइ यानाः लः त्वंकेगु, अनंलि १० न्हुया अन्तरालय् स्वकः उपचार यायेगु । प्लेसेबो-उपचारित नियन्त्रणयात ५०० एमएल स्टेराइल डिस्टिल्ड लः सिँचाइ याःगु खः । फुक्क उपचार ग्रीनहाउसया अवस्थाय् (२५ ± २°C, ७५ ± १% सापेक्षिक आर्द्रता, व ८ घण्टा प्रकाश/१६ घण्टा ख्युंया फोटोपेरियोड) याःगु ख। फुक्कं गमलाय् प्यलापतिकं लः बियाः मासिक सन्तुलित एनपीके मल (२०-२०-२०, ३.६% सल्फर व टीई माइक्रोएलिमेण्ट दुगु; जैन सीड्स, इजिप्ट) तयाः ३–४ ग्राम/लिटरया एकाग्रताय् विशिष्ट किसिमया निंतिं सिफारिस कथं फोलियर स्प्रे यानाः मासिक रुपं उपचार याःगु खः । मेगु कथं न्ह्यथना तःगु मदुसा, पूर्ण विस्तारित परिपक्व पत्ति (शीर्षं २ व ३ पत्ति) प्रत्येक जैविक प्रतिकृतिं ७२ घण्टा उपचार लिपा (एचपीटी) संकलन यानाः, होमोजेनाइज यानाः, पूल यानाः -८० °C य् भण्डारण यानाः थप विश्लेषणया निंतिं -८० °C य् भण्डारण यानाः थप विश्लेषणया निंतिं भण्डारण यानाः, तर सीमित मजू, स्थानीय अक्सिडेटिभ peroxidation of listochemical, व नन-एन्जाइमेटिक एन्टिअक्सिडेन्ट व जीन एक्सप्रेसन।
ह्वाइट मोल्ड संक्रमणया तीव्रताया मूल्यांकन टेरान एट अलं संशोधित पेटजोल्ड व डिक्सन स्केल (१९९६)या आधारय् १–९ (पूरक तालिका S2)या स्केल छ्यला वार्षिक २१ न्हु लिपा इनोकुलेशन (dpi) याःगु ख। (२००६) संक्षेपय्, इन्टरनोड व नोडया नापंया घाःया प्रगतियात अनुसरण यायेत इनोक्यूलेसनया बिन्दुइ शुरु यानाः सिमि वनस्पतिया तना व शाखाया जाँच याःगु खः । अनंलि इनोक्यूलेसनया बिन्दु निसें स्टेम वा शाखाया दकलय् तापाःगु बिन्दु तक्कया घाःया दूरी मापन याना घाःया थाय् या आधारय् १–९ स्कोर बियातःगु ख, गन (१) इनोक्यूलेसनया बिन्दु लिक्क छुं नं खनेदयेक संक्रमण मदुगु संकेत व (२–९) घाःया बिन्दु लिक्क छुं नं खनेदइगु संक्रमण मदुगु संकेत व (२–९) घाःया noppnodes a/S table S2 य् क्रमिक प्रगति अप्वइगु संकेत बिल। तुयुगु फोहर संक्रमणया तीव्रतायात अले सूत्र २ छ्यलाः प्रतिशतय् हिलाबिल :
नापं, ल्वेया प्रगति वक्र (AUDPC) अन्तर्गतया क्षेत्रफलया गणना सूत्र (शेनर व फिनी, १९७७) छ्यला याःगु ख, गुकियात नकतिनि हे जक समीकरण ३ छ्यला सामान्य सिसाबुसाया ह्याउँगु सडेजुइगु निंतिं अनुकूलित याःगु ख (चौहान व मेमेपिं, २०२०) :
गन यी = ई ti य् ल्वेया गम्भीरता, यि+१ = मेगु ई ti+१ य् ल्वेया गम्भीरता, ti = न्हापांगु मापनया ई (न्हिइ), ti+१ = मेगु मापनया ई (न्हिइ), n = कुल ई बिन्दु वा अवलोकन बिन्दुया ल्याः। फुक्क जैविक प्रतिकृतिइ २१ न्हुया निंतिं वाःपतिकं २१ न्हुया निंतिं वनस्पतिया उचाइ (सेमी), वनस्पतिया शाखाया ल्याः, वनस्पतिया पत्तिया ल्याः लिसेंया बीन वनस्पतिया वृद्धिया मापदण्ड रेकर्ड याःगु खः ।
प्रत्येक जैविक प्रतिकृतिइ उपचार लिपा ४५ न्हु (लिपांगु उपचार लिपा १५ न्हु लिपा) पातया नमूना (च्वय् निसें निगूगु व स्वंगूगु पूर्ण विकास जूगु पात) संकलन याःगु खः । प्रत्येक जैविक प्रतिकृतिइ न्यागू गमला दइ (छगू गमलाय् निगू स्वांमा) । करिब ५०० मिलिग्राम कुचाकुचा यानातःगु टिसुयात ८०% एसिटोन छ्यला ४ डिग्री सेल्सियसय् खिउँथाय् तयाः फोटोसिन्थेटिक पिग्मेन्ट (क्लोरोफिल ए, क्लोरोफिल बी व क्यारोटिनोइड) पिकायेत छ्यःगु खः । २४ घण्टा लिपा नमूनायात सेन्ट्रिफ्युज यानाः सुपरनेटेन्तयात क्लोरोफिल ए, क्लोरोफिल बी व क्यारोटिनाइडया मात्रा निर्धारणया निंतिं कोलोरिमेट्रिक रुपं युभि-१६०ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाद्जु कर्पोरेशन, जापान) छ्यला (Lichtebaring mea9ance the7sunthaler at11) या विधि कथं संकलन याःगु खः । तरङ्ग दैर्ध्य (ए४७०, ए६४६ व ए६६३ एनएम)। अन्तय् लिच्तेन्थालर (१९८७) नं वर्णन यानातःगु क्वय् बियातःगु सूत्र ४–६ छ्येला प्रकाश संश्लेषणात्मक रंगद्रव्यया मात्राया गणना याःगु ख।
७२ h उपचार लिपा (hpt) हाइड्रोजन पेरोक्साइड (H2O2) व सुपरअक्साइड एनियन (O2•−)या इन सिटु हिस्टोकेमिकल लोकलाइजेसनया निंतिं प्रत्येक जैविक प्रतिकृतिं पत्ति (शीर्षं निगूगु व स्वंगुगु पूर्ण विकास जूगु पत्ति) संकलन याःगु ख। प्रत्येक जैविक प्रतिकृतिइ न्यागू गमला दइ (छगू गमलाय् निगू स्वांमा) । प्रत्येक जैविक प्रतिकृतियात डुप्लिकेट (निगु प्राविधिक प्रतिकृति)य् विश्लेषण यानाः विधिया शुद्धता, विश्वसनीयता व पुनरुत्पादन क्षमता सुनिश्चित याःगु खः । H2O2 व O2•− क्रमशः ०.१% ३,३′-डायमिनोबेन्जिडिन (DAB; सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्ट्याड, जर्मनी) वा नाइट्रोब्लू टेट्राजोलियम (NBT; सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्ट्याड, जर्मनी) छ्यला निर्धारण याःगु ख, रोमेर एट-पीं वर्णन यानातःगु विधि कथं। (2004) व एडम एट अल. (१९८९) य् चिचीधंगु संशोधन यानाः । एच२ओ२ इन सिटुया हिस्टोकेमिकल लोकलाइजेसनया निंतिं पत्रिकायात १० एमएम ट्रिस बफर (पीएच ७.८)य् ०.१% डीएबी नापं भ्याकुम इन्फिल्त्रेट याना ६० मिनेटया निंतिं कोथाया तापक्रमय् प्रकाशय् इन्क्यूबेट यानातःगु ख। पत्रिकायात ४:१ (v/v) इथेनॉल:क्लोरोफर्म (अल-गोमहोरिया फार्मास्युटिकल्स एण्ड मेडिकल सप्लाईज, काइरो, इजिप्ट)य् ०.१५% (v/v) TCA य् ब्लीच यानाः ख्युंसे मवःतले जःया संपर्कय् तःगु ख। अथे हे भल्भयात १० एमएम पोटासियम फस्फेट बफर (pH ७.८) तयाः ०.१ w/v % HBT तयाः O2•− in situ या हिस्टोकेमिकल लोकलाइजेसनया निंतिं भ्याकुम इन्फिल्त्रेट यानातःगु खः । थुगु पत्रिकायात २० मिनेटया निंतिं कोथाया तापक्रमय् जःया दुने इन्क्यूबेट यानाः अनंलि च्वय् थें ब्लीच यानाः अनंलि गाढा नीलः/बैजनी रंगया दाग खनेदयेक प्रकाशित यानाः । थुकिया लिच्वः कथं वःगु सियुगु (H2O2 सूचकया रुपय्) वा वँचुगु-बैजनी (O2•− सूचकया रुपय्) रंगया तीव्रताया मूल्यांकन छवि प्रशोधन प्याकेज ImageJ (http://fiji.sc; ७ मार्च २०२४य् पहुँच)या फिजी संस्करण छ्यला याःगु ख।
मालोन्डियाल्डेहाइड (एमडीए; लिपिड पेरोक्सिडेसनया मार्करया रुपय्) डु व ब्रमलेज (१९९२)या विधि कथं भचा परिमार्जन याना निर्धारण याःगु ख। प्रत्येक जैविक प्रतिकृति (शीर्षं निगूगु व स्वंगूगु पूर्ण विकास जूगु पत्ति)या पत्ति ७२ h उपचार लिपा (hpt) संकलन याःगु खः । प्रत्येक जैविक प्रतिकृतिइ न्यागू गमला दुथ्याः (छगू गमलाय् निगू स्वांमा) । प्रत्येक जैविक प्रतिकृतियात डुप्लिकेट (निगु प्राविधिक प्रतिकृति)य् विश्लेषण यानाः विधिया शुद्धता, विश्वसनीयता व पुनरुत्पादन क्षमता सुनिश्चित याःगु खः । संक्षेपय्, ०.५ ग्राम ग्राउन्ड लीफ टिस्यू २०% ट्राइक्लोरोएसिटिक एसिड (टीसीए; मिलिपोरसिग्मा, बर्लिङ्गटन, एमए, अमेरिका) नापं ०.०१% ब्युटाइलेटेड हाइड्रोक्सीटोलुइन (बीएचटी; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेन्ट लुइस, एमओ, अमेरिका) दूगु एमडीए निष्कर्षणया निंतिं छ्यःगु ख। अनंलि सुपरनेतेन्तय् दूगु एमडीएया मात्रायात युभि-१६०ए स्पेक्ट्रोफोटोमिटर (शिमाद्जु कर्पोरेशन, जापान) छ्यला ५३२ व ६०० एनएमय् अवशोषण मापेयाना कोलोरिमेट्रिक कथं निर्धारण याःगु ख व अनंलि nmol g−1 FW कथं व्यक्त याःगु ख।
गैर-एन्जाइमेटिक व एन्जाइमेटिक एन्टिअक्सिडेन्टया मूल्यांकनया निंतिं प्रत्येक जैविक प्रतिकृतिं ७२ h उपचार लिपा (hpt) पत्ति (शीर्षं निगूगु व स्वंगुगु पूर्ण विकास जूगु पत्ति) संकलन याःगु खः । प्रत्येक जैविक प्रतिकृतिइ न्यागू गमला दइ (छगू गमलाय् निगू स्वांमा) । प्रत्येक जैविक नमूनायात डुप्लिकेटय् (निगू प्राविधिक नमूना) विश्लेषण यात । निगु पत्तियात तरल नाइट्रोजनं ग्राउन्ड याना एन्जाइमेटिक व नन-एन्जाइमेटिक एन्टिअक्सिडेन्ट, कुल एमिनो एसिड, प्रोलिनया मात्रा, जीन अभिव्यक्ति, व अक्सालेट क्वांटिफिकेशन निर्धारणया निंतिं प्रत्यक्ष रुपं छ्येलिगु या।
कुल घुलनशील फेनोलिक फोलिन-सिओकाल्ट्यु रिएजेन्ट (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेन्ट लुइस, एमओ, अमेरिका) छ्यला काहकोनेन एट अलं वर्णन यानातःगु विधिइ भचा परिमार्जन याना निर्धारण याःगु ख। (१९९९) संक्षेपय्, करिब ०.१ ग्राम होमोजेनाइज्ड पत्तिया टिश्यूयात २० एमएल ८०% मेथनोल तयाः २४ घण्टाया निंतिं खिउँथाय् पिकाःगु व सुपरनेटेन्तयात सेन्ट्रिफ्युगेसन धुंका संकलन याःगु ख। ०.१ एमएल नमूना अर्कयात ०.५ एमएल फोलिन-सिओकाल्ट्यु रिएजेन्ट (१०%) नाप ल्वाकछ्याना ३० एस तक्क हिला ५ मिनेट तक्क खिउँथाय् तया तःगु ख। अनंलि प्रत्येक ट्युबय् ०.५ एमएल २०% सोडियम कार्बोनेट द्रावण (Na2CO3; अल-गोमहोरिया फार्मास्युटिकल्स एण्ड मेडिकल सप्लाईज कम्पनी, काइरो, इजिप्ट) तयाः बांलाक ल्वाकछ्यानाः कोथाया तापक्रमय् खिउँथाय् १ घण्टा इन्क्यूबेट यानातःगु खः । इन्क्युबेशन धुंका रिएक्सन मिक्सचरया एब्जर्बेन्स ७६५ एनएमय् युभि-१६०ए स्पेक्ट्रोफोटोमिटर (शिमाद्जु कर्पोरेशन, जापान) छ्यला मापन याःगु ख। नमूना अर्कय् कुल घुलनशील फिनोलया एकाग्रता ग्यालिक एसिड क्यालिब्रेशन कर्भ (फिशर साइन्टिफिक, ह्याम्पटन, एनएच, अमेरिका) छ्यला निर्धारण यानाः प्रति ग्राम ताजा तौल (mg GAE g-1 ताजा तौल)या ग्यालिक एसिड समकक्षया मिलीग्रामया रुपय् व्यक्त याःगु खः ।
जेरिडेन एट अलया विधि कथं मुक्कं घुलनशील फ्लेभोनोइडया मात्रा निर्धारण याःगु खः । (२००६) भचा परिमार्जन यानाः । संक्षेपय्, ०.३ एमएल माथिया मेथनोल अर्कयात ०.३ एमएल ५% एल्युमिनियम क्लोराइड द्रावण (AlCl3; फिशर साइन्टिफिक, ह्याम्पटन, एनएच, अमेरिका) नापं ल्वाकछ्यानाः ५ मिनेटया निंतिं कोथाया तापक्रमय् इन्क्यूबेट यानाः a% mssiumta10ta ०. (अल-गोमहोरिया फार्मास्युटिकल्स एण्ड मेडिकल सप्लाईज, काइरो, इजिप्ट), बांलाक ल्वाकछ्यानाः ३० मिनेटया निंतिं कोथाया तापक्रमय् खिउँथाय् इन्क्यूबेट यानातःगु दु । इन्क्युबेशन धुंका रिएक्सन मिक्सचरया एब्जर्बेन्स ४३० एनएमय् युभि-१६०ए स्पेक्ट्रोफोटोमिटर (शिमाद्जु कर्पोरेशन, जापान) छ्यला मापन याःगु ख। नमूना अर्कय् कुल घुलनशील फ्लेभोनोइडया एकाग्रता रुटिन क्यालिब्रेशन कर्भ (TCI अमेरिका, पोर्टल्याण्ड, ओआर, अमेरिका) छ्यला निर्धारण याःगु व अनंलि प्रति ग्राम ताजा तौल (mg RE g-1 ताजा तौल)या रुटिन समकक्षया मिलीग्रामया रुपय् व्यक्त याःगु ख।
योकोयामा व हिरामात्सु (२००३) नं प्रस्तावित विधिया आधारय् परिमार्जित निनहाइड्रिन रिएजेन्ट (थर्मो साइन्टिफिक केमिकल्स, वाल्थम, एमए, अमेरिका) छ्यला सिसाबुसाया पत्तिइ कुल मुक्त एमिनो एसिडया मात्रा निर्धारण याःगु खःसा सन एट अलं परिमार्जन याःगु खः । (२००६) संक्षेपय्, ०.१ ग्राम ग्राउन्ड टिश्यूयात पीएच ५.४ बफरं पिकाःगु ख, व २०० μL सुपरनेटेन्तयात २०० μL निनहाइड्रिन (२%) व २०० μL को पाइरिडिन (१०%; स्पेक्ट्रम केमिकल, न्यू ब्रन्सविक, एनजे, अमेरिका) नापं प्रतिक्रिया याना, क्वलाकातःगु min wath3 या निंतिं a युभि-१६०ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाद्जु कर्पोरेशन, जापान) छ्यला ५८० एनएमय् मापन याःगु दु। मेखे, प्रोलिन बेट्स विधिं निर्धारण याःगु ख (बेट्स व मेमेपिं, १९७३)। प्रोलिनयात ३% सल्फोसालिसिलिक एसिड (थर्मो साइन्टिफिक केमिकल्स, वाल्थम, एमए, अमेरिका) नापं पिकायेगु व सेन्ट्रिफ्युगेसन धुंका ०.५ एमएल सुपरनेटेन्तयात १ एमएल ग्लेसियल एसिटिक एसिड (फिशर साइन्टिफिक, ह्याम्पटन, एनएच, अमेरिका) व निनहाइड्रिन को एसुरेड एट मि०सी, इन्कु ९ डी ४ या निंतिं ल्वाकछ्याना तःगु ख। ५२० एनएमय् च्वय् बियातःगु थें हे स्पेक्ट्रोफोटोमीटर छ्यलाः । पातया अर्कय् कुल मुक्त एमिनो एसिड व प्रोलिन क्रमशः ग्लाइसिन व प्रोलिन क्यालिब्रेशन कर्भ (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेन्ट लुइस, एमओ, अमेरिका) छ्यला निर्धारण यानाः mg/g ताजा तौलया रुपय् व्यक्त याःगु खः ।
एन्टिअक्सिडेन्ट एन्जाइमया एन्जाइमेटिक सक्रियता निर्धारण यायेत करिब ५०० एमजी होमोजेनाइज्ड टिस्यू ३ एमएल ५० एमएम ट्रिस बफर (पीएच ७.८) तयाः १ एमएम ईडीटीए-Na2 (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेन्ट लुइस, एमओ, अमेरिका) व ७.५% सिग्मारोइर्पिएलड सेन्ट लुइस, एमओ, अमेरिका), रेफ्रिजरेसन (४ °C) अन्तर्गत २० मिनेटया निंतिं १०,००० × g य् सेन्ट्रिफ्युज यानाः सुपरनेटेन्त (कच्चा एन्जाइम अर्क) संकलन याःगु खः (एल-नगर व मेमेपिं, २०२३; उस्मान व मेमेपिं, २०२३)। अनंलि क्याटालेज (सीएटी)यात २ एमएल ०.१ एम अल् सोडियम फस्फेट बफर (पीएच ६.५; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेन्ट लुइस, एमओ, अमेरिका) व १०० μएल २६९ एमएम एच२ओ२ द्रावणलिसे प्रतिक्रिया यानाः थुकिया एन्जाइमेटिक गतिविधि निर्धारण यायेगु विधि sNagar.Egaril,Aebi.Egar-१) विधि कथं निर्धारण याःगु खः । २०२३; उस्मान व अन्य, २०२३)। गुआइयाकोल-निर्भर पेरोक्सिडेज (पीओएक्स) एन्जाइमेटिक गतिविधि हर्राच एट अलया विधि छ्यला निर्धारण याःगु ख। (२००९) (२००८) य् चिधंगु संशोधन (एल-नगर व मेमेपिं, २०२३; उस्मान व मेमेपिं, २०२३) व पोलिफेनोल अक्सिडेज (पीपीओ)या एन्जाइमेटिक गतिविधि २.२ एमएल १०० एमएम सोडियम फस्फेट बफर (pH1TCal, μ0sl), या प्रतिक्रिया लिपा निर्धारण याःगु खः । पोर्टल्याण्ड, ओआर, अमेरिका) व १०० μl १२ एमएम एच२ओ२। विधि (एल-नगर व मेमेपिं, २०२३; उस्मान व मेमेपिं, २०२३) निसें भचा परिमार्जन यानातःगु खः । ०.१ एम फस्फेट बफर (पीएच ६.०)य् ताजा तयार यानातःगु ३ एमएल क्याटेकोल सोलुसन (थर्मो साइन्टिफिक केमिकल्स, वाल्थम, एमए, अमेरिका) (०.०१ एम) नाप प्रतिक्रिया यायेधुंका थ्व परीक्षण याःगु ख। २४० एनएम (ए२४०)य् एच२ओ२या अपघटनया अनुगमन यानाः क्याट गतिविधि मापन याःगु खः, ४३६ एनएमय् अवशोषण अप्वइगु अनुगमन यानाः पीओएक्स गतिविधि मापन याःगु खः (ए४३६), व पीपीओ गतिविधि ४९५ एनएमय् अवशोषण उतारचढाव रेकर्ड यानाः प्रत्येक मिनेट u31 (U315 for U315) मापन याःगु खः । स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाद्जु, जापान)।
रियल-टाइम आरटी-पीसीआरया छ्येला स्वंगु एन्टिअक्सिडेन्ट-सम्बन्धी जीनया ट्रान्सक्रिप्ट स्तर लुइकेत छ्यःगु ख, गुकिलि पेरोक्सिसोमल क्याटालेज (PvCAT1; जेनब्यांक एक्सेसन ल्याः KF033307.1), सुपरअक्साइड डिस्मुटेज (PvSOD; जेनब्यांक एक्सेसन ल्याः XM_06863955) ला। एक्सेसन ल्याः केवाई१९५००९.१), सिमि पत्तिइ (शीर्षं निगूगु व स्वंगूगु पूर्ण विकास जूगु पत्तिइ) अन्तिम उपचारया ७२ घौ लिपा । संक्षेपय् धायेगु खःसा निर्माताया प्रोटोकल कथं सिम्पली पी टोटल आरएनए एक्स्ट्राक्सन किट (क्यट ल्याः बीएससी५२एस१; बायोफ्लक्स, बायोरी टेक्नोलोजी, चीन) छ्यला आरएनए अलग याःगु खः । अनंलि, निर्माताया निर्देशन कथं टप स्क्रिप्ट TM सीडीएनए सिन्थेसिस किट छ्यला सीडीएनए संश्लेषण याःगु खः । च्वय् बियातःगु स्वंगू जीनया प्राइमर सिक्वन्सयात पूरक तालिका एस३ स धलखय् तयातःगु दु । PvActin-3 (GenBank एक्सेसन नम्बर: XM_068616709.1)यात हाउसकिपिङ जीनया रुपय् छ्येलातःगु ख व सापेक्ष जीन अभिव्यक्तिया गणना २-ΔΔCT विधि छ्येला याःगु ख (लिवाक व श्मिटजेन, २००१)। बायोटिक तनाव (सामान्य फलफूल व एन्थ्राक्नोज फंगस कोलेटोट्रिचम लिन्डेमुथियानम दथुइ असंगत अन्तरक्रिया) व अजैविक तनाव (सुख्खा, लवणता, म्हो तापक्रम) अन्तर्गत एक्टिन स्थिरता क्यनातःगु दु (बोर्गेस एट अल, २०१२)।
जिमिसं न्हापां प्रोटिन-प्रोटिन ब्लास्ट उपकरण (BLASTp २.१५.०+) छ्यला एस स्क्लेरोटिओरमय् ओक्सालोएसिटेट एसिटाइलहाइड्रोलेज (ओएएच) प्रोटिनया सिलिको विश्लेषणय् जीनोम-व्यापी यानागु खः (अल्टस्चुल एट अल, १९९७, २००५)। संक्षेपय्, जिमिसं एस्परजिलस फिजिएन्सिस सीबीएस ३१३.८९ (एएफओएएच; ट्याक्साइड: ११९१७०२; जेनब्यांक एक्सेसन नम्बर एक्सपी_०४०७९९४२८.१; ३४२ एमिनो एसिड) व पेनिसिलियम लजेना (पीएलओएएच२; ट्याक्साइड८बैंक;९९) या ओएएच छ्यलागु खः । XP_056833920.1; 316 एमिनो एसिड) एस स्क्लेरोटिओरम (ट्याक्साइड: 5180)य् होमोलोगस प्रोटिनया नक्सा दयेकेगु निंतिं क्वेरी सिक्वन्सया रुपय् छ्यलिगु या। राष्ट्रिय जैव प्रविधि सूचना केन्द्र (एनसीबीआई)या वेबसाइट, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/ य् जेनब्यांकय् दकलय् लिपांगु उपलब्ध एस स्क्लेरोटिओरम जीनोम तथ्यांकया विरुद्ध ब्लास्टपी याःगु खः ।
नापं, एस स्क्लेरोटिओरम (SsOAH) पाखें अनुमानित ओएएच जीन व ए फिजिएन्सिस सीबीएस ३१३.८९ व पी लाजेनापाखें पीएलओएएचया विकासवादी विश्लेषण व फ़ाइलोजेनेटिक वृक्ष MEGA2TT1, the JTamura111 (JTamura1) matrix य् अधिकतम सम्भावना विधि छ्यला अनुमान याःगु खः । मोडेल (जोन्स एट अल।, 1992). एस स्क्लेरोटिओरमपाखें सकल अनुमानित ओएएच जीन (एसएसओएएच)या प्रोटिन अनुक्रमया मल्टिपल एलाइन्मेन्ट विश्लेषण व कन्स्ट्रेन्ट-आधारित एलाइन्मेन्ट टूल (कोबाल्ट; https://www.ncbi.nlm.nih.cobalt/tools/gov/www.ncbi.nlm.nih.cobalt/tools/ व अगरवाला, २००७)। थुकिया नापं, एस स्क्लेरोटिओरमपाखें एसएसओएएचया दकलय् बांलाःगु मेल खनीगु एमिनो एसिड अनुक्रमयात क्लस्टलडब्लु (http://www.genome.jp/tools-bin and the conservising in the clustalw) छ्यला क्वेरी अनुक्रम (AfOAH व PlOAH) (लार्किन एट अल, २००७) नापं संरेखित याःगु खः । ईएसप्रिप्ट टूल (संस्करण ३.०; https://एस्प्रिप्ट.आइबीसीपी.एफआर/इएसप्रिप्ट/इएसप्रिप्ट/इन्डेक्स.पीएचपी)।
थ्व बाहेक, एस स्क्लेरोटिओरम एसएसओएएचया अनुमानित कार्यात्मक प्रतिनिधि डोमेन व संरक्षित थाय् अन्तरक्रियाशील रुपं इन्टरप्रो उपकरण (https://www.ebi.ac.uk/interpro/) छ्यला थीथी परिवारय् वर्गीकृत याःगु खः (ब्लुम एट अल, २०२१)। अन्तय्, अनुमानित एस स्क्लेरोटिओरम एसएसओएएचया स्वंगु आयामी (३डी) संरचना मोडेलिङ प्रोटिन होमोलोजी/एनालोजी रेकग्निशन इन्जिन (फाइर२ सर्भर भर्सन २.०; http://www. २०१५) व स्विस-मोडेल सर्भर (https://swissmodel.expasy.org/) छ्यला मान्यता बियातःगु दु (बियासिनी एट अल, २०१४)। अनुमानित स्वंगु आयामी संरचना (पीडीबी फर्मेट)यात युसीएसएफ-चिमेरा प्याकेज (संस्करण १.१५; https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/ ) छ्यला अन्तरक्रियाशील रुपं कल्पना याःगु ख (पेटर्सन व मेमेपिं, २००४)।
स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरमया माइसेलियाय् ओक्सालोएसिटेट एसिटाइलहाइड्रोलेज (SsOAH; GenBank एक्सेसन नम्बर: XM_001590428.1)या ट्रान्सक्रिप्सनल स्तर निर्धारण यायेत क्वांटिटेटिभ रियल-टाइम फ्लोरोसेन्स पीसीआर छ्यःगु ख। संक्षेपय्, एस. वयां लिपा कोषयात अन्तिम आईसी५० एकाग्रताय् (क्रमशः करिब ४० व ३.२ एमजी/एल) एल-ओर्निथिन व फंगिसाइड रिजोलेक्स-टी तयाः वासः यानाः मेगु २४ घण्टाया निंतिं व हे अवस्थाय् संस्कारित याःगु खः । इन्क्युबेशन धुंका कल्चरयात २५०० आरपीएमय् ५ मिनेटया निंतिं सेन्ट्रिफ्युज याना सुपरनेतेन्त (फंगल माइसेलियम) जीन एक्सप्रेसन विश्लेषणया निंतिं संकलन याःगु ख। अथे हे संक्रमित टिश्यूया सतहय् ह्याउँगु फोहर व कपासया माइसेलियम दयावःगु संक्रमित वनस्पतिपाखें संक्रमण लिपा ०, २४, ४८, ७२, ९६, व १२० घण्टाय् फंगल माइसेलियम संकलन याःगु खः । फंगल माइसेलियमं आरएनए पिकाःगु व अनंलि च्वय् न्ह्यथनातःकथं सिडिएनए संश्लेषण याःगु खः । एसएसओएएचया निंतिं प्राइमर अनुक्रम पूरक तालिका एस३ स धलखय् तयातःगु दु । एसएसएक्टिन (जेनब्यांक एक्सेसन नम्बर: एक्सएम_००१५८९९१९.१)यात हाउसकिपिङ जीनया रुपय् छ्येलातःगु ख, व सापेक्ष जीन अभिव्यक्तिया गणना २-ΔΔCT विधि छ्येला याःगु ख (लिवाक व श्मिटजेन, २००१)।
आलु डेक्सट्रोज ब्रुथ (पीडीबी) व फंगल प्याथोजेन स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम दूगु वनस्पतिया नमूनाय् भचा परिमार्जन यानाः जु व झाङ (२०००)या विधि कथं अक्सालिक एसिड निर्धारण याःगु खः । संक्षेपय्, एस स्क्लेरोटिओरम आइसोलेटयात पीडीबी दूगु फ्लास्कय् इनोक्यूलेसन यानाः अनंलि छगू हिलाच्वंगु इन्क्यूबेटर (मोडेल I2400, न्यू ब्रन्सविक साइन्टिफिक कम्पनी, एडिसन, एनजे, अमेरिका)य् १५० rpm य् २५ ± २ °C (dark h myrowth constant g.li इन्क्यूबेशन धुंका फंगल कल्चरयात न्हापां व्हाटम्यान #१ फिल्टर पेपरं फिल्टर याना २५०० आरपीएमय् ५ मिनेटया निंतिं सेन्ट्रिफ्युज याना अवशिष्ट माइसेलियम लिकायेगु ज्या जुल। अक्सालेटया थप मात्रात्मक निर्धारणया निंतिं सुपरनेतेन्त मुंकाः ४°Cय् भण्डारण यानातःगु खः । वनस्पतिया नमूना दयेकेगु निंतिं करिब ०.१ ग्राम वनस्पतिया टिस्यूया टुक्रा स्वक्वः डिस्टिल लः (प्रत्येक पटक २ एमएल) तयाः पिकाःगु ख। अनंलि नमूनायात २५०० आरपीएमय् ५ मिनेटया निंतिं सेन्ट्रिफ्युज यानाः सुपरनेटेन्तयात व्हाटम्यान नम्बर १ फिल्टर पेपरं ड्राई फिल्टर यानाः थप विश्लेषणया निंतिं संकलन याःगु खः ।
अक्सालिक एसिडया मात्रात्मक विश्लेषणया निंतिं प्रतिक्रिया मिश्रणयात ग्लास स्टपर यानातःगु ट्युबय् थुकथं क्रमय् तयार याःगु खः : ०.२ एमएल नमूना (वा पीडीबी कल्चर फिल्ट्रेट वा अक्सालिक एसिड स्ट्यान्डर्ड सोलुसन), ०.११ एमएल ब्रोमोफेनोल ब्लू (बीपीबी, १ एमएम; फिसर केमिकल, पिट्सबर्ग १ एमएल अफ पीए१०एच। एसिड (H2SO4; अल-गोमहोरिया फार्मास्युटिकल्स व मेडिकल सप्लाईज, काइरो, इजिप्ट) व ०.१७६ एमएल १०० एमएम पोटासियम डाइक्रोमेट (K2Cr2O7; TCI केमिकल्स, पोर्टल्याण्ड, ओआर, अमेरिका), व अनंलि द्रावणयात ४.८ एमएल प्लेसमेडिएट व ४.८ एमएल प्लेसमेडिटरय् पातला यानातःगु खः । ६० डिग्री सेल्सियस लःया बाथय् । १० मिनेट लिपा ०.५ एमएल सोडियम हाइड्रोक्साइड द्रावण (NaOH; ०.७५ M) तयाः प्रतिक्रिया दिकल। रिएक्सन मिक्सचरया एब्जर्बेन्स (ए६००) युभि-१६० स्पेक्ट्रोफोटोमिटर (शिमाद्जु कर्पोरेशन, जापान) छ्यला ६०० एनएमय् मापन याःगु ख। कल्चर फिल्ट्रेट व वनस्पति नमूनाया मात्रा निर्धारणया निंतिं क्रमशः पीडीबी व डिस्टिल्ड वाटरयात नियन्त्रणया रुपय् छ्यःगु खः । कल्चर फिल्ट्रेटय् अक्सालिक एसिडया मात्रा, पीडीबी माध्यमया प्रति मिलिलिटर अक्सालिक एसिडया माइक्रोग्राम (μg.mL−1)या रुपय् व्यक्त, व पातया अर्कय्, प्रति ग्राम ताजा तौलया अक्सालिक एसिडया माइक्रोग्राम (μg.g.g−1 FW)या रुपय् व्यक्त, छगू ​​कर्भेथम एसिड क्यालिब्रेशन, वाल्मिकल एसिड क्यालिब्रेशन, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका)।
अध्ययनया दथुइ फुक्क प्रयोगत पूर्ण रुपं रैन्डामाइज्ड डिजाइन (सीआरडी)य् डिजाइन यानातःगु खः गुकी प्रति उपचार ६ गू जैविक प्रतिकृति व प्रति जैविक प्रतिकृति ५ गू गमला (प्रति गमला निगू वनस्पति) मेगु कथं न्ह्यथनातःगु मदुसा । जैविक प्रतिकृतियात डुप्लिकेटय् विश्लेषण यात (निगू प्राविधिक प्रतिकृति) । व हे प्रयोगया पुनरुत्पादन क्षमता जाँच यायेत प्राविधिक प्रतिकृति छ्यःगु खः तर नक्कली प्रतिकृति मजुइकेत तथ्यांकीय विश्लेषणय् छ्यःगु मदु । टकी-क्रामर इमान्दारीपूर्वक महत्वपूर्ण भिन्नता (एचएसडी) परीक्षण (p ≤ 0.05)या लिपा भेरिएन्सया विश्लेषण (ANOVA) छ्यला तथ्यांकीय विश्लेषण याःगु खः । इन भिट्रो प्रयोगया निंतिं प्रोबिट मोडेल छ्येला IC50 व IC99 मूल्य गणना याना ९५% कन्फिडेन्स इन्टरभल गणना याःगु ख।
इजिप्टया एल गाबिया गभर्नरेटय् थीथी सोयाबीन बुँइ मुक्कं ४ आइसोलेट संकलन याःगु खः । पीडीए माध्यमय् फुक्क आइसोलेटं क्रीमी ह्याउँगु माइसेलियम दयेकिगु या गुकिलिं याकनं हे कपासया ह्याउँगु रंगय् हिलावन (चित्र १ ए) व अनंलि स्क्लेरोटियम चरणय् बेज वा ब्राउन रंगय् हिलावन। स्क्लेरोटिया सामान्यतया घना, हाकुगु, गोलाकार वा अनियमित आकारया, ५.२ निसें ७.७ मिमी ताःहाकः व ३.४ निसें ५.३ मिमी व्यासया जुइ (चित्र १ ख)। च्यागू आइसोलेटं २५ ± २ °C (चित्र १ ए)य् १०–१२ न्हुया इन्क्यूबेशन लिपा कल्चर माध्यमया सिथय् स्क्लेरोटियाया मार्जिनल प्याटर्न विकास याःसां प्रति प्लेट स्क्लेरोटियाया ल्याः उमिगु दथुइ उल्लेखनीय रुपं फरक खनेदु (P < 0.001), of isolate the3nomberest ha.3001). १.५३ स्क्लेरोटिया प्रति प्लेट; अथे हे आइसोलेट #३ नं मेमेगु आइसोलेट स्वया पीडीबीइ अप्व अक्सालिक एसिड दयेकल (३.३३ ± ०.४९ μg.mL−१; चित्र १D)। आइसोलेट # ३ य् फाइटोप्याथोजेनिक फंगस स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरमया विशिष्ट मोर्फोलोजिकल व माइक्रोस्कोपिक विशेषता खने दु। दसुया निंतिं, पीडीएय् आइसोलेट #३ या कोलोनीत तीव्र गतिं अप्वया वन, क्रीमी ह्याउँगु (चित्र १ ए), रिभर्स बेज वा हल्का सलमोन ह्याउँगु-भूरा रंगया जुइ, व ९ सेमि व्यासया प्लेटया सतहयात पूवंक त्वपुइत २५ ± २°Cय् ६-७ न्हु माल। माथिया मोर्फोलोजिकल व माइक्रोस्कोपिक विशेषताया आधारय् आइसोलेट # ३ यात स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरमया रुपय् म्हसीकल।
चित्र १.सामान्य फलफूलया बालीपाखें अलग यानातःगु एस स्क्लेरोटिओरमया विशेषता व रोगजनकता । (ए) पीडीए माध्यमय् च्यागू एस स्क्लेरोटिओरम आइसोलेटया माइसेलियल वृद्धि, (बी) च्यागू एस स्क्लेरोटिओरम आइसोलेटया स्क्लेरोटिया, (ग) स्क्लेरोटियाया ल्याः (प्रति प्लेट), (डी) पीडीबी माध्यमय् ओक्सालिक एसिड स्राव (μg.mL−1), व (ई) disease oflasorurm i ग्रीनहाउसया अवस्थाय् संवेदनशील व्यावसायिक फलफूलया जात गिजा ३ । मूल्य न्यागु जैविक प्रतिकृति (n = 5) या औसत ± SD प्रतिनिधित्व याइ। थी थी आखलं उपचारया दथुइ तथ्यांकया ल्याखं महत्वपूर्ण भिन्नता क्यनी (p < 0.05)। (F–H) आइसोलेट # ३ (dpi) नापं इनोक्यूलेसन यायेधुंका १० न्हु लिपा क्रमशः भूमिया च्वय् च्वंगु तना व सिलिक्सय् विशिष्ट ह्याउँगु फोहरया लक्षण खनेदत। (I) एस. क्लस्टरिङ लाइनया च्वय् च्वंगु ल्याखं क्षेत्रया कभरेज (%) क्यनि, व क्लस्टरिङ लाइनया च्वय् च्वंगु ल्याखं शाखाया हाकः क्यनि।
थ्व बाहेक, रोगजनकताया पुष्टि यायेत, प्राप्त च्यागु एस स्क्लेरोटिओरम आइसोलेटयात ग्रीनहाउस परिस्थितिइ संवेदनशील व्यावसायिक बीन कल्टिभार गिजा ३ यात इनोक्यूलेसन यायेत छ्यःगु ख, गुगु कोचया पोष्टुलेट (चित्र १ ई) नापं मेल खनि। यद्यपि प्राप्त फुक्क फंगल आइसोलेटत रोगजनक जुल व ग्रीन बीन (cv. Giza 3) यात संक्रमण यायेफु, गुकिं यानाः फुक्क भूमिया च्वय् च्वंगु भागय् (चित्र १F), विशेष यानाः स्टेम (चित्र १G) व पोडय् (चित्र १H) य् विशिष्ट ह्याउँगु फोहरया लक्षण खनेदत, तर postosolation (चित्र १H) य् दकलय् अप्वः १० निगू स्वतन्त्र प्रयोगय् आक्रामक अलग । आइसोलेट ३ य् दकलय् अप्व ल्वेया गम्भीरता (%) स्याउया वनस्पतिइ खने दु (२४.० ± ४.०, ५८.० ± २.०, व ७६.७ ± ३.१ संक्रमण लिपा क्रमशः ७, १४, व २१ न्हु; चित्र १एफ)।
दकलय् आक्रामक एस स्क्लेरोटिओरम आइसोलेट # ३ या पहिचान आन्तरिक ट्रान्सक्रिप्ट स्पेसर (ITS) सिक्वेन्सिङ (चित्र १I)या आधारय् थप पुष्टि याःगु खः । आइसोलेट #३ व २० रेफरेन्स आइसोलेट/स्ट्रेन दथुइ फाइलोजेनेटिक विश्लेषणं इमिगु दथुइ उच्च समानता (>९९%) क्यंगु दु। थुकियात ध्यानय् तयेबहःजू कि एस स्क्लेरोटिओरम आइसोलेट #३ (५३३ बीपी) अमेरिकी एस स्क्लेरोटिओरम आइसोलेट एलपीएम३६ नाप सुख्खा मटरया बी (जेनबैंक एक्सेसन नम्बर एमके८९६६५९.१; ५४० बीपी) व चिनियाँ एस. OR206374.1; 548 bp), गुकिलिं बैजनी (Matthiola incana) स्टेम रोट जुइ, थ्व फुक्कं डेन्ड्रोग्रामया च्वय् ब्यागलं ब्यागलं पुचलय् तयातःगु दु (चित्र १I)। न्हुगु अनुक्रम एनसीबीआई डाटाबेसय् जमा यानातःगु दु व थुकिया नां “स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम – आइसोलेट वाईएन-२५” (जेनब्यांक एक्सेसन नम्बर पीभी२०२७९२) तःगु दु। थ्व खनेदइ कि आइसोलेट ३ दकलय् आक्रमणकारी आइसोलेट ख; अथे जूगुलिं, लिपाया फुक्क प्रयोगय् अध्ययनया निंतिं थुगु आइसोलेट ल्यःगु खः ।
एस स्क्लेरोटिओरम आइसोलेट ३ विरुद्ध थी-थी एकाग्रताय् (१२.५, २५, ५०, ७५, १०० व १२५ एमजी/एल) डायमिन एल-ओर्निथिन (सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्ट्याड, जर्मनी)या एन्टिब्याक्टेरियल सक्रियताया अनुसन्धान इन भिट्रोय् याःगु ख। थ्व खँ लुमंकेबहःजू कि एल-ओर्निथिनं एन्टिब्याक्टेरियल प्रभाव क्यन व बुलुहुँ एस स्क्लेरोटिओरम हाइफेया रेडियल वृद्धियात डोज-निर्भर कथं पनेफु (चित्र २क, ख)। परीक्षण याःगु दकलय् अप्वः एकाग्रताय् (१२५ mg/L) एल-ओर्निथिनं दकलय् अप्वः माइसेलियल वृद्धि निरोधक दर (९९.६२ ± ०.२७%; चित्र २ ख) क्यंगु दु, गुगु व्यावसायिक फंगिसाइड रिजोलेक्स-टीया बराबर खः (निरोधकता दर उच्च चित्र २९ द चित्र २ ख । (१० एमजि/एल), उत्तिग्यंक प्रभावकारिता क्यनाच्वंगु दु ।
चित्र २ स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम विरुद्ध एल-ओर्निथिनया इन भिट्रो एन्टिब्याक्टेरियल गतिविधि। (क) एस स्क्लेरोटिओरम विरुद्ध एल-ओर्निथिनया थीथी एकाग्रताया एन्टिब्याक्टेरियल गतिविधिया तुलना व्यावसायिक फंगिसाइड रिजोलेक्स-टी (१० एमजी/एल) नापं। (बी, सी) एल-ओर्निथिन (१२.५, २५, ५०, ७५, १०० व १२५ एमजी/एल) वा रिजोलेक्स-टी (२, ४, ६, ८ व १० एमजीएल), सम्बन्धित एकाग्रताया उपचार लिपा एस स्क्लेरोटिओरम माइसेलियल वृद्धिया निरोध दर (%)। मूल्य न्यागु जैविक प्रतिकृति (n = 5) या औसत ± SD प्रतिनिधित्व याइ। थी थी आखलं उपचारया दथुइ तथ्यांकीय भिन्नता क्यनी (p < 0.05)। (डी, ई) क्रमशः एल-ओर्निथिन व व्यावसायिक फंगिसाइड रिजोलेक्स-टी के प्रोबिट मोडेल प्रतिगमन विश्लेषण। प्रोबिट मोडेल रिग्रेसन रेखायात ठोस वँचुगु रेखाया रुपय् क्यनातःगु दु, व कन्फिडेन्स इन्टरभल (९५%)यात ड्यास यानातःगु ह्याउँगु रेखाया रुपय् क्यनातःगु दु।
नापं प्रोबिट रिग्रेसन विश्लेषण यानाः उकिया लिसे स्वापू दूगु प्लाट तालिका १ व चित्र २D,E य् क्यनातःगु दु । संक्षेपय्, एल-ओर्निथिनया स्वीकार्य ढलान मूल्य (y = २.९२x − ४.६७) व स्वापू दूगु महत्वपूर्ण तथ्यांक (कक्स व स्नेल आर२ = ०.३७०९, नागेलकेर्के आर२ = ०.४९९८ व पी <०.०००१; चित्र २डी)या संकेत छगू वृद्धि जूगु एन्टिफंगरम विरुद्ध एन्टिफंगरम. फंगिसाइड रिजोलेक्स-टी (y = १.९६x − ०.९९, कक्स व स्नेल आर२ = ०.१२४२, नागेलकेर्के आर२ = ०.१७०८ व पी <०.०००१) (तालिका १)।
तालिका १ एस स्क्लेरोटिओरम विरुद्ध एल-ओर्निथिन व व्यावसायिक फंगिसाइड “रिजोलेक्स-टी”या अर्ध-अधिकतम निरोधात्मक एकाग्रता (आईसी५०) व आईसी९९ (एमजी/एल)या मूल्य।
समग्रय्, एल-ओर्निथिन (२५० mg/L) एस स्क्लेरोटिओरम-संक्रमित वनस्पति (नियन्त्रण; चित्र ३ ए)या तुलनाय् उपचारित सामान्य सिमि वनस्पतिइ ह्याउँगु फोहरया विकास व गंभीरताय् उल्लेखनीय रुपं म्हो जुल। संक्षेपय्, उपचार मयाःगु संक्रमित नियन्त्रण वनस्पतिया ल्वेया गम्भीरता बुलुहुँ अप्वया वंसां (५२.६७ ± १.५३, ८३.२१ ± २.६१, व ९२.३३ ± ३.०६%), एल-ओर्निथिनं प्रयोगया दथुइ ल्वेया गम्भीरता (%) ±.० ±.० ±.०,१.५९ (८.१.०) उल्लेखनीय रुपं म्हो यात। १.००, व २६.३६ ± ३.०७) क्रमशः ७, १४, व २१ न्हुया उपचार लिपा (dpt) (चित्र ३ ए)। अथे हे एस स्क्लेरोटिओरम संक्रमित सिमि वनस्पतियात २५० एमजी/एल एल-ओर्निथिनया उपचार यायेबलय् ल्वय् प्रगति वक्र (एयूडीपीसी)या अन्तर्गतया क्षेत्रफल उपचार मयाःगु नियन्त्रणय् १२७४.३३ ± ३३.१३ निसें २८१.०३ ± ७.९५ पोजिटिभ कन्ट्रोलय् म्हो जुल, गुगु एमजी/० एल अफलाइट स्वयां म्हो जुल । रिजोलेक्स-टी फंगिसाइड (१८३.६१ ± ७.७१; चित्र ३ ख)। निक्वःगु प्रयोगय् नं थ्व हे प्रवृत्ति खनेदत ।
चित्र ३ - ग्रीनहाउस परिस्थितिइ स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरमया कारणं सामान्य सिसाबुसाया ह्याउँगु सडे जुइगु विकासय् एल-ओर्निथिनया एक्सोजेनस प्रयोगया प्रभाव । (ए) २५० एमजी/एल एल-ओर्निथिनया उपचार लिपा सामान्य सिमिया ह्याउँगु फोहरया ल्वय् प्रगति वक्र। (ख) एल-ओर्निथिनया उपचार लिपा साधारण सिसाबुसाया ह्याउँगु फोहरया ल्वय् प्रगति वक्र (एयूडीपीसी) अन्तर्गतया क्षेत्रफल। मूल्य न्यागु जैविक प्रतिकृति (n = 5) या औसत ± SD प्रतिनिधित्व याइ। थी थी आखलं उपचारया दथुइ तथ्यांकया ल्याखं महत्वपूर्ण भिन्नता क्यनी (p < 0.05)।
२५० एमजी/एल एल-ओर्निथिनया एक्सोजेनस प्रयोगं ४२ न्हु लिपा बुलुहुँ वनस्पतिया उचाइ (चित्र ४क), प्रति वनस्पति शाखाया ल्याः (चित्र ४ख), व प्रति वनस्पतिया पत्तिया ल्याः (चित्र ४ग) अप्वल । व्यावसायिक फंगिसाइड रिजोलेक्स-टी (५० एमजी/एल) अध्ययन यानातःगु फुक्क पोषण मापदण्डय् दकलय् अप्वः प्रभाव लाकूगु खःसा २५० एमजी/एल एल-ओर्निथिनया एक्सोजेनस अनुप्रयोगं उपचार मयाःगु नियन्त्रणया तुलनाय् निगूगु दकलय् अप्वः प्रभाव लाकूगु खः (चित्र ४क–सी) । मेखे एल-ओर्निथिन उपचारं प्रकाश संश्लेषण रंगद्रव्य क्लोरोफिल ए (चित्र ४डी) व क्लोरोफिल बी (चित्र ४ई)या मात्राय् छुं नं उल्लेखनीय प्रभाव मक्यं, तर नकारात्मक नियन्त्रण (०.५६ ± ०.०३ mg/g fr wt) व नकारात्मक नियन्त्रण (०g. सकारात्मक नियन्त्रण (०.४६ ± ०.०२ एमजी/ग्राम एफआर डब्लुटी; चित्र ४एफ)। समग्रय् थ्व लिच्वःं एल-ओर्निथिन उपचारित फलफूलया निंतिं फाइटोटक्सिक मखुगु व उकिया वृद्धियात तकं उत्तेजित यायेफुगु संकेत बी।
चित्र ४ - ग्रीनहाउस परिस्थितिइ स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम संक्रमित सिमि पत्तिइ वृद्धि विशेषता व प्रकाश संश्लेषण रंगद्रव्यय् एक्सोजेनस एल-ओर्निथिनया प्रयोगया प्रभाव। (क) पौधाया उचाइ (सेमी), (ख) प्रति पौधाया शाखाया ल्याः, (ग) पौधाया पत्तिया ल्याः, (घ) क्लोरोफिल एया मात्रा (mg g-1 fr wt), (ङ) क्लोरोफिल bया मात्रा (mg g-1 fr wt), (च) कुल क्यारोटिनाइडया मात्रा (mg g-1 fr)। मूल्य धयागु न्यागू जैविक प्रतिकृति (n = ५) या औसत ± एसडि खः । थी थी आखलं उपचारया दथुइ तथ्यांकया ल्याखं महत्वपूर्ण भिन्नता क्यनी (p < 0.05)।
प्रतिक्रियाशील अक्सिजन प्रजाति (ROS; हाइड्रोजन पेरोक्साइड [H2O2] कथं व्यक्त) व फ्री रेडिकल्स (सुपरअक्साइड एनआयन [O2•−] कथं व्यक्त)या इन सिटु हिस्टोकेमिकल स्थानीयकरणं एल-ओर्निथिन (२५० mg/L)या एक्सोजेनस अनुप्रयोगं H. nmol.g−1 FW; चित्र ५क) व O2•− (३२.६९ ± ८.५६ nmol.g−१ FW; चित्र ५ख) निगुलिं अप्रतिक्रियाशील संक्रमित वनस्पतिया संचय (१७३.३१ ± १२.०६) व १४९.३५ ± ७.९४ एनडब्लु प्लानेटेड व ५. mg/L व्यावसायिक फंगिसाइड रिजोलेक्स-टी (क्रमशः १७०.१२ ± ९.५० व १५७.०० ± ७.८१ nmol.g−१ fr wt) ७२ h. hpt (चित्र ५क, ख) अन्तर्गत H2O2 व O2•− उच्च स्तर संचयित। अथे हे टिसीए-आधारित मालोन्डियाल्डेहाइड (एमडीए) परीक्षणं एस स्क्लेरोटिओरम संक्रमित सिमि वनस्पतिइ थःगु पातय् अप्वः एमडीए (११३.४८ ± १०.०२ nmol.g fr wt) मुंकातःगु खनेदु (चित्र ५सी) । तर एल-ओर्निथिनया एक्सोजेनस छ्येलेज्यां लिपिड पेरोक्सिडेसनय् यक्व म्हो याइ गुकिया प्रमाण उपचारित वनस्पतिइ एमडीएया मात्रा म्हो जुल (३३.०८ ± ४.०० nmol.g fr wt)।
चित्र ५ - ग्रीनहाउस परिस्थितिइ संक्रमण लिपा ७२ घण्टाय् एस स्क्लेरोटिओरम संक्रमित सिमि पत्तिइ अक्सिडेटिभ स्ट्रेस व नन एन्जाइमेटिक एन्टिअक्सिडेन्ट प्रतिरक्षा संयन्त्रया प्रमुख मार्करय् एक्सोजेनस एल-ओर्निथिनया प्रयोगया प्रभाव। (ए) हाइड्रोजन पेरोक्साइड (एच२ओ२; एनएमओएल जी-१ एफडब्लू) ७२ एचपीटीइ, (बी) सुपरअक्साइड एनआयन (ओ२•-; एनएमओएल जी-१ एफडब्लू) ७२ एचपीटीइ, (सी) मालोन्डियाल्डिहाइड (एमडीए; एनएमओएल जी-१ एफडब्लू) ७२ एचपीटीइ, (डी) कुल घुलनशील फेनोल (एफजीए-१ई) (ई) ७२ एचपीटीइ कुल घुलनशील फ्लेभोनोइड (एमजी आरई जी−१ एफडब्लु), (एफ) ७२ एचपीटीइ कुल मुक्त एमिनो एसिड (एमजी जी−१ एफडब्लु), व (जी) प्रोलिन सामग्री (एमजी जी−१ एफडब्लु) ७२ एचपीटीइ। मूल्य ५ जैविक प्रतिकृति (n = ५)या औसत ± मानक विचलन (औसत ± एसडी) प्रतिनिधित्व याइ। थी थी आखलं उपचारया दथुइ तथ्यांकया ल्याखं महत्वपूर्ण भिन्नता क्यनी (p < 0.05)।