इम्युनोमोडुलेटरी मेटाबोलाइट ट्युमर माइक्रोइन्भाइरोमेन्ट (TME)या छगू मू विशेषता ख, तर छुं अपवादयात त्वःताः इमिगु म्हसीका यक्व ल्याखय् अज्ञात जुयाच्वंगु दु। थन जिमिसं उच्च ग्रेड सेरस कार्सिनोमा (एचजीएससी) दुपिं ल्वगितेगु ट्युमर व एसाइटिसया ट्युमर व टि सेलया विश्लेषण याना थ्व थी-थी टिएमई कम्पार्टमेन्टया मेटाबोलोम लुइका। एसाइटिस व ट्यूमर कोषिकाय् मेटाबोलाइटया तःधंगु भिन्नता दइ । एसाइटिसया तुलनाय् ट्युमर-इन्फिल्त्रेटिङ टि सेलय् १-मिथाइलनिकोटिनामाइड (एमएनए) यक्व हे समृद्ध जुइ। टि सेलय् एमएनएया स्तर अप्वइगु जूसां निकोटिनामाइड एन-मिथाइलट्रान्सफेरेज (एस-एडेनोसिलमेथियोनिनं निकोटिनामाइडय् मिथाइल ग्रुपया हस्तान्तरणयात उत्प्रेरित याइगु एन्जाइम)या अभिव्यक्ति फाइब्रोब्लास्ट व ट्युमर सेलय् जक सीमित जुइ। क्रियाशील रुपं एमएनए टि सेलयात ट्युमर-प्रमोटिङ साइटोकाइन ट्युमर नेक्रोसिस फ्याक्टर अल्फा स्राव यायेत प्रेरित याइ। अतः, टिएमई-निष्पन्न एमएनए टि सेलया प्रतिरक्षा नियमनय् योगदान बी व मनुया क्यान्सरया वासःया निंतिं सम्भावित इम्युनोथेरापी लक्ष्यया प्रतिनिधित्व याइ।
ट्युमर-निष्पन्न मेटाबोलाइटं एन्टि-ट्युमर इम्युनिटीइ गहिरो निरोधात्मक प्रभाव लाकेफु, व अप्व प्रमाणं क्यनाच्वंगु दु कि इमिसं ल्वेया प्रगतिया निंतिं मू चालक शक्तिया रुपय् नं ज्या यायेफु (१)। वारबर्ग इफेक्टया नापं, लिपांगु ज्याय् ट्युमर कोषया मेटाबोलिक अवस्था व ट्युमर माइक्रोइन्भाइरोमेन्ट (TME)या प्रतिरक्षा अवस्थानापया स्वापूया विशेषता क्यनेगु ज्या न्ह्याःगु दु। माउस मोडेल व मनुया टि सेलया अध्ययनं ग्लुटामिन मेटाबोलिज्म (२), अक्सिडेटिभ मेटाबोलिज्म (३) व ग्लुकोज मेटाबोलिज्म (४) थी-थी इम्युन सेल उपसमूहय् स्वतन्त्र रुपं ज्या यायेफुगु क्यंगु दु। थुगु लँपुइ यक्वं मेटाबोलाइटं टि सेलया एन्टि ट्यूमर ज्यायात पनेफु । थ्व प्रमाणित जूगु दु कि कोएन्जाइम टेट्राहाइड्रोबायोप्टेरिन (BH4)या नाकाबन्दीं टि सेलया प्रसारयात क्षति यायेफु, व म्हय् BH4 अप्वइगुलिं CD4 व CD8या मध्यस्थताय् जुइगु एन्टि-ट्युमर इम्युन रेस्पोन्स अप्वयेकेफु। थ्व नापं, काइनुरेनिनया इम्युनोसप्रेसिभ प्रभावयात बीएच४ (५)या प्रशासनं उद्धार यायेछिं। आइसोसाइट्रेट डिहाइड्रोजेनेज (IDH) म्युटेन्ट ग्लियोब्लास्तोमाय् एनान्टिओमेटाबोलिक (R)-2-हाइड्रोक्सीग्लुटारेट (R-2-HG)या स्रावं टि सेल एक्टिभेसन, प्रोलिफरेसन व साइटोलाइसिस एक्टिभिटीयात पनेफु (६)। नकतिनि ग्लाइकोलाइसिसया उपोत्पाद मिथाइलग्लाइओक्सल माइलोइद मूलया सप्रेसर सेलं दयेकिगु व मिथाइलग्लियोक्सलया टि सेल ट्रान्सफरं इफेक्टर टि सेलया ज्यायात पनेफु धका क्यनातःगु दु। उपचारय् मिथाइलग्लियोक्सलया तटस्थीकरणं माइलोइद-डेरिभाइड सप्रेसर सेल (एमडीएससी)या सक्रियतायात पार यायेफु व माउस मोडेलय् चेकपोइन्ट ब्लकेड थेरापीयात सिनर्जिस्टिक रुपं अप्वयेकेफु (७)। थ्व अध्ययनं सामूहिक रुपं टि सेलया ज्या व सक्रियतायात नियमन यायेत टिएमइ-निष्पन्न मेटाबोलाइटया मू भूमिकायात बः बियाच्वंगु दु।
डिम्बाशय क्यान्सरय् टि सेल डिसफंक्सन व्यापक रुपं रिपोर्ट जूगु दु (८) । थ्व छुं भचा हाइपोक्सिया व असामान्य ट्युमर भास्कुलचरय् अन्तर्निहित मेटाबोलिक विशेषताया कारणं जुइ (९), गुकिया लिच्वः कथं ग्लुकोज व ट्रिप्टोफानयात ल्याक्टिक एसिड व काइनुरेनिन थें न्याःगु उपोत्पादय् हिलेगु याइ। अत्यधिक एक्स्ट्रासेल्युलर ल्याक्टेटं इन्टरफेरोन-γ (IFN-γ)या उत्पादन म्हो याइ व माइलोसप्रेसिभ उपसमूहया विभेदनयात न्ह्याकी (१०, ११)। ट्रिप्टोफानया सेवनं प्रत्यक्ष रुपं टि सेल प्रोलिफरेसनयात पनेगु व टि सेल रिसेप्टर सिग्नलिङयात पनेगु याइ (१२-१४)। थ्व अवलोकनया बाबजुद, इम्युन मेटाबोलिज्मया घेराय् यक्व ज्या अनुकूलित माध्यम छ्येला इन भिट्रो टि सेल कल्चरय् याःगु ख, वा इन भिभोय् होमोलोगस माउस मोडेलय् सीमित जुल, गुकिलिं मनुया क्यान्सर व फिजियोलोजिकल म्याक्रो व माइक्रो वातावरणया विषमतायात पूर्ण रुपं प्रतिबिम्बित याइमखु।
डिम्बाशयया क्यान्सरया छगू सामान्य विशेषता धयागु पेरिटोनियल स्प्रेड व एसाइटिस खनेदइगु खः । एसाइटिसय् कोषिका तरल पदार्थ मुंकेगु उन्नत ल्वय् व कमजोर प्रोग्नोसिसलिसे स्वापू दु (१५) । रिपोर्ट कथं थ्व अद्वितीय कम्पार्टमेन्ट हाइपोक्सिक जुइ, भास्कुलर एन्दोथेलियल ग्रोथ फ्याक्टर (VEGF) व इन्डोलिमिन २,३-डाइअक्सिजेनेज (IDO)या उच्च स्तर दइ, व टि रेगुलेटरी सेल व माइलोइद इन्हिबितेरी सेलं घुसपैठ याइ (१५-१८)। एसाइटिसया मेटाबोलिक वातावरण ट्युमरया हे वातावरण स्वया फरक जुइफु, अतः, पेरिटोनियल स्पेसय् टि सेलया रिप्रोग्रामिंग स्पष्ट मजू। नापं, ट्युमरया वातावरणय् दूगु एसाइटिस व मेटाबोलाइट दथुइ मू भिन्नता व विषमतां प्रतिरक्षा कोषया घुसपैठ व ट्युमरय् इमिगु ज्याय् पंगः थनेफु, व थप अनुसन्धानया आवश्यकता दु।
थ्व समस्या समाधान यायेत जिमिसं छगू संवेदनशील कोष पृथक्करण व तरल क्रोमेटोग्राफी ट्यान्डेम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस/एमएस) विधिया डिजाइन यानाः थीथी कोष प्रकार (सीडी ४ + व सीडी ८ + टी कोष नापं) नापं ट्युमर दुने व दथुइ अध्ययन यानागु खः थुकिया मेटाबोलाइटं छगू हे एसिटिस व ल्वगिया ट्युमर वातावरणय् कोषयात स्प्यान याइ । जिमिसं थ्व विधियात उच्च-आयामिक प्रवाह साइटोमेट्री व एकल-कोष आरएनए अनुक्रमण (scRNA-seq) नापं छ्येला थ्व मू जनसंख्याया मेटाबोलिक स्थितिया उच्च समाधान चित्र बी। थ्व विधिं ट्युमर टि सेलय् १-मिथाइलनिकोटिनामाइड (एमएनए)या स्तरय् यक्व वृद्धि जूगु खने दु, व इन भिट्रो प्रयोगं टि सेलया ज्याय् एमएनएया इम्युनोमोडुलेटरी प्रभाव न्हापा मसिउगु खने दु। सामान्यतया, थ्व विधिं ट्युमर व प्रतिरक्षा कोष दथुइ पारस्परिक मेटाबोलिक अन्तरक्रियायात क्यनि, व प्रतिरक्षा नियमन मेटाबोलाइटया अद्वितीय अन्तर्दृष्टि प्रदान याइ, गुकिलिं टि सेल-आधारित डिम्बाशय क्यान्सर इम्युनोथेरापी वासःया अवसरया वासःया निंतिं उपयोगी जुइफु।
जिमिसं छगू हे इलय् ग्लुकोज अपटेकया परिमाण यायेत उच्च-आयामिक प्रवाह साइटोमेट्री छ्यला [२-(एन-(७-नाइट्रोफेनिल-२-ओक्सा-१,३-डायजा-४-इल)एमिनो)-२-डिओक्सीग्लुकोज (२-एनबीडीजी) व माइटोकन्ड्रियाल गतिविधि [माइटोट्र्याकर डीप रेड, एमटी२डी१ द्वारा) प्रतिरक्षा कोष व ट्युमर कोष जनसंख्यायात छुटे याइगु विशिष्ट मार्कर (तालिका S2 व चित्र S1A)। थ्व विश्लेषणं क्यंगु दु कि टि सेलया तुलनाय् एसाइटिस व ट्युमर सेलय् ग्लुकोज अपतेकया स्तर अप्व जुइ, तर माइटोकन्ड्रियाया सक्रियताय् म्हो जक अन्तर दइ। ट्युमर कोषया औसत ग्लुकोज अपतेक [CD45-EpCAM (EpCAM)+] टि कोषया स्वंगु निसें प्यंगू गुणा जुइ, व CD4 + T कोषया औसत ग्लुकोज अपतेक CD8 + T कोषया १.२ गुणा जुइ, गुकिलिं ट्युमर इन्फिल्त्रेटिङ लिम्फोसाइट्सय् ट्युमर इन्फिल्त्रेटिङ लिम्फोसाइट्स (TIL मेटाबोलिक saFig e requirements saFig1) दु धकाः संकेत बी। थ्व स्वया ट्युमर कोषय् माइटोकन्ड्रियाल सक्रियता सीडी४ + टी कोषया थें न्यागु जुइ, व निगु हे कोष प्रकारया माइटोकन्ड्रियाल सक्रियता सीडी८ + टी कोष स्वया अप्व जुइ (चित्र १ ख)। सामान्यकथं, थुगु लिच्वःतसें मेटाबोलिक स्तर क्यनी । ट्युमर कोषया मेटाबोलिक सक्रियता सीडी४ + टी कोष स्वया अप्व जुइ, व सीडी४ + टी कोषया मेटाबोलिक सक्रियता सीडी८ + टी कोष स्वया अप्व जुइ। कोष प्रकारय् थ्व प्रभाव दुसां ट्युमरया तुलनाय् सीडी४ + व सीडी८ + टी कोषया मेटाबोलिक अवस्था वा एसिटय् इमिगु सापेक्षिक अनुपातय् छुं नं कथंया स्थिर भिन्नता मदु (चित्र १C)। थ्व स्वया सीडी४५-सेल फ्राक्सनय् ट्युमरय् एपिसीएएम+ सेलया अनुपात एसाइटिसया तुलनाय् अप्वइ (चित्र १डी)। जिमिसं इपिसिएएम+ व इपिसिएएम- सेल कम्पोनेन्टया दथुइ स्पष्ट मेटाबोलिक भिन्नता नं खना । EpCAM+ (ट्युमर) कोषय् EpCAM- कोष स्वया अप्व ग्लुकोज अपतेक व माइटोकन्ड्रियाल सक्रियता दइ, गुगु टिएमईइ ट्युमर कोषय् फाइब्रोब्लास्तया मेटाबोलिक सक्रियता स्वया यक्व अप्व जुइ (चित्र १, ई व एफ)।
(ए व बी) ग्लुकोज अपटेक (२-एनबीडीजी) (ए) व सीडी ४ + टी सेलया माइटोकन्ड्रियाल गतिविधि (माइटोट्र्याकर गाढा लाल)या मेडियन फ्लोरोसेन्स इन्टेन्सिटी (एमएफआई) (बी) प्रतिनिधि ग्राफ (बाँया) व सारणीबद्ध तथ्यांक (दायाँ), सीडी ८ + टी सेल व EpCAM + टी सेल ए व EpCAM + CD45- से। (C) एसाइटिस व ट्यूमरय् सीडी ४ + व सीडी ८ + कोष (सीडी ३ + टी कोषया)या अनुपात। (D) एसाइटिस व ट्यूमर (CD45−) में EpCAM + ट्यूमर कोशिकाओं का अनुपात। (ई व एफ) ईपीसीएएम + सीडी४५-ट्यूमर व ईपीसीएएम-सीडी४५-मैट्रिक्स ग्लुकोज अपटेक (२-एनबीडीजी) (ई) व माइटोकन्ड्रियाल गतिविधि (माइटोट्रैकर गाढा लाल) (एफ) प्रतिनिधि ग्राफ (बाँया) व सारणीबद्ध तथ्यांक ( दायाँ) एसिट व ट्यूमर कोशिका। (जी) फ्लो साइटोमेट्री द्वारा सीडी२५, सीडी१३७ व पीडी१ अभिव्यक्तिया प्रतिनिधि ग्राफ। (एच व आई) सीडी ४ + टी सेल (एच) व सीडी ८ + टी सेल (आई) पर सीडी २५, सीडी १३७ व पीडी १ अभिव्यक्ति। (जे व के) सीसीआर७ व सीडी४५आरओया अभिव्यक्तिया आधारय् भोला, केन्द्रीय स्मृति (टीसीएम), इफेक्टर (टेफ) व इफेक्टर मेमोरी (टेम) फेनोटाइप। एसाइटिस व ट्यूमरय् सीडी ४ + टी सेल (जे) व सीडी ८ + टी सेल (के)या प्रतिनिधि चित्र (बाँया) व टेबुलर तथ्यांक (दायाँ)। जोडी टि-परीक्षणं निर्धारण याःगु पी मूल्य (*पी<०.०५, **पी<०.०१ व ***पी<०.००१)। थ्व ध्वःं ज्वःलाःगु ल्वगितय् गु प्रतिनिधित्व याइ (n = ६) । एफएमओ, फ्लोरोसेन्स माइनस छगू; एमएफआइ, मेडियन फ्लोरोसेन्स इन्टेन्सिटी ।
मेगु विश्लेशणं तसकं समाधान जूगु टि सेल फेनोटाइपिक अवस्थाया दथुइ मेगु महत्वपूर्ण भिन्नता लुइकल । ट्युमरय् सक्रिय (चित्र १, जी निसें I) व इफेक्टर मेमोरी (चित्र १, जे व के) एसाइटिस (सीडी३ + टी सेलया अनुपात) स्वया यक्व अप्व जुइ। थुकथं हे, सक्रियता मार्कर (सीडी२५ व सीडी१३७) व डिप्लेसन मार्कर [प्रोग्राम सेल डेथ प्रोटिन १ (पीडी१)] या अभिव्यक्तिं फेनोटाइपया विश्लेषण यानाः क्यंगु दु कि यद्यपि थ्व जनसंख्याया मेटाबोलिक विशेषता फरक फरक दु (चित्र S1, B to E) , तर छुं नं महत्वपूर्ण मेटाबोलिक भिन्नता memoryor वा memoryse, S1 दथुइ निरन्तर रुपं मदुगु खः । एफ निसें आइ) । थ्व लिच्वःत मेसिन लर्निंग विधि छ्यला स्वतः सेल फेनोटाइप (२१) असाइन याना पुष्टि याःगु ख, गुकिलिं ल्वगिया एसाइटिसय् यक्व ल्याखय् बोन म्यारो सेल (CD45 + / CD3- / CD4 + / CD45RO +) दूगु अझ नं लुइकल (चित्र S2A )। सकल म्हसीकातःगु कोष प्रकारय् थ्व माइलोइद कोष जनसंख्यां दकलय् अप्व ग्लुकोज अपतेक व माइटोकन्ड्रियाल सक्रियता क्यंगु दु (चित्र S2, B निसें G)। थ्व लिच्वःतेसं एचजीएससी ल्वगितेगु एसाइटिस व ट्युमरय् खनेदूगु यक्व कोष प्रकार दथुइ तच्वःगु मेटाबोलिक भिन्नतायात उजागर याइ।
टिएलया मेटाबोनोमिक विशेषता थुइकेगु मू हाथ्या ट्युमरं पर्याप्त शुद्धता, गुणस्तर व परिमाणया टि सेल नमूना अलग यायेमाःगु आवश्यकता ख। लिपांगु अध्ययनं क्यंगु दु कि फ्लो साइटोमेट्रीइ आधारित सोर्टिङ व बिड इन्रिचमेन्ट विधिं सेलुलर मेटाबोलाइट प्रोफाइलय् हिउपाः हयेफु (२२-२४)। थ्व समस्यायात पार यायेत जिमिसं एलसी-एमएस/एमएसं विश्लेषण याये न्ह्यः सर्जिकल रिसेक्टेड ह्युमन ओभरियन क्यान्सरं टिआईएलयात अलग व अलग यायेत बिड इन्रिचमेन्ट विधियात अनुकूलित याना (सामग्री व विधि स्वयादिसँ; चित्र २ ए)। थ्व प्रोटोकलया मेटाबोलाइट हिउपाःया समग्र प्रभावया मूल्यांकन यायेत जिमिसं माथिया बिड अलग यायेगु चरण लिपा स्वस्थ दातातय्सं सक्रिय याःगु टि सेलया मेटाबोलाइट प्रोफाइलयात बिड अलग मजूगु तर च्वापुइ च्वनाच्वंगु कोषलिसे तुलना याना । थ्व गुणस्तर नियन्त्रण विश्लेषणं थ्व निगु अवस्था दथुइ उच्च सहसंबंध दूगु खने दु (r = 0.77), व ८६ मेटाबोलाइटया पुचःया प्राविधिक पुनरावृत्ति उच्च पुनरावृत्ति दूगु खने दु (चित्र २B)। अतः, थ्व विधिं कोष प्रकारया समृद्धि जुइगु कोषय् सही मेटाबोलाइट विश्लेषण यायेफु, गुकिलिं एचजीएससीइ विशिष्ट मेटाबोलाइट म्हसीकेगु निंतिं न्हापांगु उच्च-रिजोलुसनया प्लेटफर्म प्रदान याइ, गुकिलिं मनुतेसं कोष विशिष्टता यौन मेटाबोलिज्म प्रोग्रामया गहिरो थुइका कायेत सक्षम याइ।
(ए) चुम्बकीय मणि समृद्धिया स्कीमेटिक डायग्राम । एलसी-एमएस/एमएसं विश्लेषण याये न्ह्यः कोषिकात लगातार स्वक्वः चुम्बकीय मणि समृद्धि जुइ वा च्वापुइ च्वनी । (बि) मेटाबोलाइटया प्रचुरताय् समृद्धि प्रकारया प्रभाव। प्रत्येक समृद्धि प्रकार ± SE या निंतिं स्वंगू मापनया औसत । सिइसे च्वंगु ध्वः १:१ स्वापू क्यनी । अक्ष लेबलय् क्यनातःगु हानं हानं मापनया इन्ट्रा-क्लास कोरेलेसन (आइसिसि) । एनएडी, निकोटिनामाइड एडेनिन डाइन्युक्लियोटाइड। (सि) ल्वगिया मेटाबोलाइट विश्लेषणया ज्याया प्रवाहया स्कीमेटिक डाइग्राम । ल्वगितय् के एसाइटिस बाय् ट्यूमर मुंकाः क्रायोप्रिजर्भ याइ । प्रत्येक नमूनाया छगू चिधंगु भागयात फ्लो साइटोमेट्रीं विश्लेषण याःगु ख धाःसा ल्यं दुगु नमूनायात सीडी४+, सीडी८+ व सीडी४५- कोषया निंतिं स्वंगु चरणया समृद्धि याःगु ख। थुगु कोषिका अंशयात एलसि-एमएस/एमएस छ्यलाः विश्लेषण याःगु खः । (डी) मानकीकृत मेटाबोलाइट प्रचुरताया ताप नक्सा। डेन्ड्रोग्रामं नमूनाया दथुइ युक्लिडियन दूरीया वार्डया क्लस्टरिङ्गयात प्रतिनिधित्व याइ । (E) नमूना मेटाबोलाइट नक्शाया प्रिन्सिपल कम्पोनेन्ट एनालिसिस (PCA), प्रत्येक नमूनाया स्वंगु प्रतिलिपि क्यनाः, छम्ह हे ल्वगिया नमूनायात छगू लाइनं स्वानातःगु दु । (च) ल्वगिइ कन्डिसन यानातःगु नमूनाया मेटाबोलाइट प्रोफाइलया पीसीए (अर्थात आंशिक रिडन्डेन्सी छ्यला); नमूना ताजि उत्तल पतवारपाखें सीमित जुइ । पिसि १, मू घटक १; पिसि२, मू ब्व २ ।
थ्व धुंका, जिमिसं थ्व समृद्धि विधि छ्यला ६ म्ह एचजीएससी ल्वगितेगु प्राथमिक एसाइटिस व ट्युमरय् सीडी४ +, सीडी८ + व सीडी४५-सेल फ्राक्सनय् ९९ मेटाबोलाइटया विश्लेषण याना (चित्र २सी, चित्र एस३ए व तालिका एस३ व एस४)। ब्याजया जनसंख्या जीवित कोषया मू तःधंगु नमूनाया २% निसें ७०% जुइ, व कोषया अनुपात ल्वगितेगु दथुइ यक्व भिन्न जुइ। मणियात अलग यायेधुंका ब्याजया समृद्ध अंश (सीडी४+, सीडी८+ वा सीडी४५-) औसतन नमूनाय् दूगु सकल जीवित कोषया ८५% स्वया अप्व जुइ। थ्व समृद्धि विधिं मनुया ट्युमर टिस्यू मेटाबोलिज्मं कोष जनसंख्याया विश्लेषण यायेत अनुमति बी, गुगु तःधंगु नमूनापाखें यायेगु असम्भव जुइ। थ्व प्रोटोकल छ्येला जिमिसं l-kynurenine व adenosine, थ्व निगु बांलाक्क विशेषता दूगु इम्युनोसप्रेसिभ मेटाबोलाइट ट्युमर T सेल वा ट्युमर सेलय् अप्वइगु निर्धारण याना (चित्र S3, B व C)। अतः, थ्व लिच्वःतेसं झीगु कोष पृथक्करण व मास स्पेक्ट्रोमेट्री प्रविधिया ल्वगिया टिश्यूइ जैविक रुपं महत्त्वपूर्ण मेटाबोलाइट मालेगु निष्ठा व क्षमता क्यनि।
जिमिगु विश्लेषणं नं ल्वगि दुने व दथुइ कोष प्रकारया सशक्त मेटाबोलिक पृथक्करण खनेदत (चित्र २डी व चित्र एस४ए)। विशेष यानाः मेमेपिं ल्वगितेगु तुलनाय् ७०म्ह ल्वगितेगु मेटाबोलिक विशेषता फरक खनेदु (चित्र २ई व चित्र एस४बी), गुकिलिं ल्वगितेगु दथुइ पर्याप्त मेटाबोलिक विषमता दयेफुगु संकेत बी। थुकी लुमंकेबहःजू, मेमेपिं विरामीया तुलनाय् (१.२ निसें २ लिटर; तालिका एस १) विरामी ७० (८० एमएल) मुंकूगु कुल एसिटिसया मात्रा म्हो जक खनेदु । प्रिन्सिपल कम्पोनेन्ट विश्लेषणया इलय् अन्तर-रोगी विषमताया नियन्त्रण (दसु, आंशिक रिडन्डेन्सी विश्लेषण छ्येला) कोष प्रकार दथुइ निरन्तर हिउपा क्यनि, व कोष प्रकार व/वा सूक्ष्म वातावरण मेटाबोलाइट प्रोफाइल कथं स्पष्ट रुपं एकत्रित जुइ (चित्र २F )। एकल मेटाबोलाइटया विश्लेषणं थ्व प्रभावयात बः बिया कोष प्रकार व सूक्ष्म वातावरण दथुइ महत्त्वपूर्ण भिन्नता लुइकल। थ्व खँ लुमंकेबहःजू कि दकलय् चरम भिन्नता खनेदूगु एमएनए ख, गुकिलि सामान्यतया सीडी४५- कोष व ट्युमरय् घुसपैठ याइगु सीडी४+ व सीडी८+ कोषय् समृद्ध जुइ (चित्र ३ए)। सीडी४ + कोषया निंतिं थ्व प्रभाव दकलय् अप्व खने दु, व सीडी८ + कोषय् दूगु एमएनए नं वातावरणं तसकं प्रभावित जुइगु खनेदु। तर थ्व महत्वपूर्ण मखु, छाय् धाःसा ६ म्ह विरामी मध्ये स्वम्हसित जक ट्युमर सीडी८+ स्कोरया मूल्यांकन यायेफइ । एमएनएया नापं, एसाइटिस व ट्युमरय् थी-थी कथंया कोषय् टिआइएलय् बांमलाक्क विशेषता दूगु मेमेगु मेटाबोलाइट नं भिन्न रुपं समृद्ध जुइ (चित्र एस३ व एस४)। अथे जूगुलिं, थुगु तथ्यांकं थप अनुसन्धानया निंतिं इम्युनोमोडुलेटरी मेटाबोलाइटया छगू आशाजनक सेट क्यनी ।
(क) एसाइटिस व ट्यूमर से सीडी ४ +, सीडी ८ + व सीडी ४५- कोशिकाओं में एमएनए का सामान्यीकृत सामग्री। बक्स प्लाटय् मेदियान (रेखा), इन्टरक्वार्टाइल रेन्ज (फ्रेम हिन्ज) व डाटा रेन्ज क्यनि, गुकिलि इन्टरक्वार्टाइल रेन्ज (फ्रेम व्हिस्कर)या १.५ गुणा तक्क जुइ। ल्वगि सामग्री व विधिइ वर्णन यानातःगु कथं ल्वगिया लिम्मा मान छ्यला P मान (*P<0.05 व **P<0.01) निर्धारण या। (बि) एमएनए मेटाबोलिज्मया स्कीमेटिक डायग्राम (६०) । मेटाबोलाइट: एस-एडेनोसिल-१-मेथियोनिन; एसएएच, एस-एडेनोसिन-१-होमोसिस्टीन; एनए, निकोटिनामाइड; एमएनए, १-मिथाइलनिकोटिनामाइड; २-पीवाई, १-मिथाइल- २-पाइरिडोन-५-कार्बोक्सामाइड; ४-पीवाई, १-मिथाइल-४-पाइरिडोन-५-कार्बोक्सामाइड; एनआर, निकोटिनामाइड राइबोज; एनएमएन, निकोटिनामाइड मोनोन्यूक्लियोटाइड। एन्जाइम (वाउँगु): एनएनएमटी, निकोटिनामाइड एन-मिथाइलट्रान्सफेरेज; एसआईआरटी, सिर्टुइन्स; एनएएमपीटी, निकोटिनामाइड फस्फोरिबोसिल ट्रान्सफरेज; एओएक्स१, एल्डिहाइड अक्सिडेज १; एनआरके, निकोटिनामाइड राइबोसाइड किनेज; एनएमएनएटी, निकोटिनामाइड मोनो न्यूक्लियोटाइड एडेनिलेट ट्रान्सफरेज; Pnp1, प्यूरिन न्यूक्लियोसाइड फस्फोरिलेज। (सी) एसाइटिस (ग्रे) व ट्यूमर (लाल; n = 3 रोगी) के scRNA-seq के t-SNE। (डी) scRNA-seq छ्यला म्हसीकातःगु थीथी कोष जनसंख्याय् एनएनएमटी अभिव्यक्ति। (ई) एसके-ओभी-३, मानव भ्रूण किड्नी (एचईके) २९३टी, टी सेल व एमएनए-उपचारित टी सेल में एनएनएमटी व एओएक्स१ की अभिव्यक्ति। एसके-ओभि-३ या सापेक्ष लथ्याःगु अभिव्यक्ति क्यनातःगु दु । एसइएम नापं अभिव्यक्तिया स्वरुप क्यनातःगु दु (n = ६ स्वस्थ दाता)। ३५ स्वयां अप्वः सिटि भ्यालुयात अनडिटेक्टेबल (यूडि) धकाः काइ । (एफ) एसके-ओभी-३, एचईके२९३टी, टी सेल व टी सेलय् एसएलसी२२ए१ व एसएलसी२२ए२या अभिव्यक्ति ८एमएम एमएनएलिसे वासः याःगु दु । एसके-ओभि-३ या सापेक्ष लथ्याःगु अभिव्यक्ति क्यनातःगु दु । एसइएम नापं अभिव्यक्तिया स्वरुप क्यनातःगु दु (n = ६ स्वस्थ दाता)। ३५ स्वयां अप्वः सिटि भ्यालुयात अनडिटेक्टेबल (यूडि) धकाः काइ । (जी) एमएनए नापं ७२ घण्टा इन्क्यूबेशन यायेधुंका सक्रिय स्वस्थ दाता टि कोषय् कोष एमएनए सामग्री। एसइएम नापं अभिव्यक्तिया स्वरुप क्यनातःगु दु (n = ४ स्वस्थ दाता)।
एमएनए एस-एडेनोसिल-१-मेथियोनिन (SAM) निसें निकोटिनामाइड (NA)य् निकोटिनामाइड एन-मिथाइलट्रान्सफेरेज (NNMT; चित्र ३B)या माध्यमं मिथाइल ग्रुपयात स्थानान्तरण याना दयेकिगु या। एनएनएमटी थी-थी मनुया क्यान्सरय् ओभरएक्सप्रेस जुइ व थ्व प्रोलिफरेसन, इन्भेसन व मेटास्टेसिस नाप स्वापू दु (२५-२७)। टिएमइइ टि सेलय् एमएनएया स्रोतयात बांलाक्क थुइकेत जिमिसं स्वम्ह एचजीएससी ल्वगितेगु एसाइटिस व ट्युमरय् सेल प्रकारय् एनएनएमटीया अभिव्यक्तिया विशेषता क्यनेत scRNA-seq छ्यला (तालिका S5)। करिब ६,५०० कोषया विश्लेषणं क्यंगु दु कि एसाइटिस व ट्युमर वातावरणय् एनएनएमटी अभिव्यक्ति अनुमानित फाइब्रोब्लास्ट व ट्युमर कोष जनसंख्याय् सीमित जुल (चित्र ३, सी व डी)। थ्व खँ लुमंकेबहःजू कि छुं नं जनसंख्याय् पीटीपीआरसी (सीडी४५ +) (चित्र ३डी व चित्र एस५ए) व्यक्त याइगु स्पष्ट एनएनएमटी अभिव्यक्ति मदु, गुकिलिं मेटाबोलाइट स्पेक्ट्रमय् खनेदूगु एमएनए टि सेलय् दुहां वःगु संकेत बी। एल्दिहाइड अक्सिडेज १ (AOX1)या अभिव्यक्तिं एमएनएयात १-मिथाइल-२-पाइरिडोन-५-कार्बोक्सामाइड (२-PYR) वा १-मिथाइल-४-पाइरिडोन-५-कार्बोक्सामाइड (४- PYR)य् हिलाबी; चित्र ३B) नं COL1A1 (चित्र S5A) व्यक्त याइगु फाइब्रोब्लास्तया जनसंख्याय् सीमित दु, गुकिलिं छथाय् तयाः टि सेलय् पारम्परिक एमएनए मेटाबोलिज्मया क्षमता मदुगु संकेत बी। थ्व एमएनए-सम्बन्धी जीनया अभिव्यक्तिया स्वरुप एचजीएससी ल्वगितेगु एसाइटिसपाखें निगूगु स्वतन्त्र कोष डाटा सेट छ्यला प्रमाणित याःगु ख (चित्र S5B; n = 6) (16)। नापं, एमएनए वासः याःगु स्वस्थ दाता टि कोषया क्वांटिटेटिभ पोलिमरेज चेन रिएक्सन (क्यूपीसीआर) विश्लेषणं नियन्त्रण एसके-ओभी-३ ओभरियन ट्युमर कोषया तुलनाय् एनएनएमटी वा एओएक्स१ लगभग अभिव्यक्त मजूगु क्यंगु दु (चित्र ३ई)। थ्व अप्रत्याशित लिच्वःतेसं एमएनए फाइब्रोब्लास्ट वा ट्युमरं टिएमइइ लिक्कया टि सेलय् पिहां वयेफुगु संकेत बी।
उम्मेदवारय् घुलनशील वाहक २२ (एसएलसी२२) परिवार (एसएलसी२२ए१, एसएलसी२२ए२ व एसएलसी२२ए३)ं एन्कोड यानातःगु अर्गानिक क्याटियन ट्रान्सपोर्टर १ निसें ३ (ओसीटी१, ओसीटी२ व ओसीटी३)या परिवार दुथ्याःसां एमएनएया सम्भावित ट्रान्सपोर्टर अझ नं अपरिभाषित जुयाच्वंगु दु (२८)। स्वस्थ दाता टि कोषं एमआरएनएया क्यूपीसीआरं एसएलसी२२ए१या अभिव्यक्ति स्तर म्हो तर एसएलसी२२ए२या लुइके मफइगु स्तर क्यंगु दु, गुकिलिं थ्व न्हापा साहित्यय् रिपोर्ट जूगु पुष्टि याःगु दु (चित्र ३एफ) (२९)। थ्व स्वया एसके-ओभी-३ ओभरियन ट्युमर सेल लाइनय् निगु हे ट्रान्सपोर्टरया उच्च स्तर व्यक्त जुल (चित्र ३एफ)।
टि सेलय् विदेशी एमएनएयात सोसे यायेगु क्षमता दु कि मदु धकाः परीक्षण यायेत स्वस्थ दाता टि सेलयात एमएनएया थीथी एकाग्रताया उपस्थितिइ ७२ घण्टा तक संवर्धन याःगु खः । एक्सोजेनस एमएनएया अभावय् एमएनएया सेलुलर कन्टेन्ट लुइके फइमखु (चित्र ३जी)। तर एक्सोजेनस एमएनए नापं वासः याःगु सक्रिय टि सेलय् कोषय् एमएनएया मात्रा खुराकय् निर्भर जुइगु वृद्धि खनेदु, ६ एमएम एमएनए तक्क (चित्र ३जी)। थ्व लिच्वःं ट्रान्सपोर्टर एक्सप्रेसनया स्तर म्हो जूसां व इन्ट्रासेल्युलर एमएनए मेटाबोलिज्मया निंतिं जिम्मेवार मू एन्जाइमया अभाव जूसां नं टिएलं अझ नं एमएनए कायेफुगु संकेत बी।
ल्वगितेगु टि सेलय् मेटाबोलाइटया स्पेक्ट्रम व इन भिट्रो एमएनए अवशोषण प्रयोगं क्यान्सर-सम्बन्धी फाइब्रोब्लास्त (सीएएफ)ं एमएनए पिकाइगु सम्भावना अप्वयेकी व ट्युमर सेलं टिआईएलया फेनोटाइप व ज्यायात नियन्त्रित यायेफु। एमएनएया टि सेलय् प्रभाव निर्धारण यायेत स्वस्थ दाता टि सेलयात एमएनएया उपस्थिति वा अनुपस्थितिइ इन भिट्रोय् सक्रिय याना इमिगु प्रजनन व साइटोकाइन उत्पादनया मूल्यांकन याःगु ख। दकलय् अप्वः मात्राय् एमएनए तयेधुंकाः ७ न्हु लिपा जनसंख्या दोब्बर जुइगु ल्याः मध्यम रुपं म्हो जुल, धाःसा फुक्क मात्राय् जोश कायम जुल (चित्र ४क) । थ्व नापं, एक्सोजेनस एमएनएया उपचारया लिच्वः कथं ट्युमर नेक्रोसिस फ्याक्टर-α (TNFα; चित्र ४B) व्यक्त याइगु सीडी४ + व सीडी८ + टी कोषया अनुपात अप्वइ। थ्व स्वया सीडी४ + टी कोषय् IFN-γया इन्ट्रासेल्युलर उत्पादन यक्व म्हो जुल, तर सीडी८ + टी कोषय् मखु, व इन्टरल्युकिन २ (IL-2; चित्र ४, C व D)य् छुं नं उल्लेखनीय हिउपा मवः। अतः, थ्व एमएनए-उपचारित टि सेल कल्चरया सुपरनेतेन्तया एन्जाइम-लिङ्क्ड इम्युनोसोर्बेन्ट एसे (एलिसा)ं टिएनएफαय् उल्लेखनीय वृद्धि, आइएफएन-γय् कमी, व आइएल-२इ छुं नं हिउपाः मवःगु खनेदु (चित्र ४, ई निसें जी)। । IFN-γ म्हो जुल धाःसा टि सेलया एन्टि ट्युमर सक्रियतायात पनेगु ज्याय् एमएनएया भूमिका जुइफु धकाः संकेत बी। टि सेल-मध्यस्थता साइटोटक्सिसिटीइ एमएनएया प्रभावया अनुकरण यायेत, ग्रीन फ्लोरोसेन्ट प्रोटिन (जीएफपी) -सीएआर-टी) सेलं नियमित फोलेट रिसेप्टर α व सीएआर-टी (जीएफपी)यात लक्षित याइगु चिमेरिक एन्टिजन रिसेप्टर टि (एफआरα-सीएआर-टी) सेल स्वस्थ दाता पेरिफेरल हि पीबी ( मोनोन्युअर सेल)ं उत्पादन याइ। सीएआर-टी कोषयात एमएनएया उपस्थितिइ २४ घण्टाया निंतिं संस्कारित याःगु ख, व अनंलि १०:१या इफेक्टर टु टार्गेट रेसियोय् फोलेट रिसेप्टर α एक्सप्रेस याइगु मनुया एसके-ओभी-३ ओभरियन ट्युमर कोषनाप को-कल्चर यानातःगु ख। एमएनए उपचारया लिच्वः कथं एफआरα-सीएआर-टी कोषया हत्याया गतिविधिइ यक्व म्हो जुल, गुगु एडेनोसिनं वासः याःगु एफआरα-सीएआर-टी कोषया थें हे खनेदु (चित्र ४एच)।
(क) ७ न्हुया दिं संस्कृतिं प्रत्यक्ष रुपं कुल व्यवहारिक कोष ल्याः व जनसंख्या दोब्बर जुइगु (पीडी) बार ग्राफं ६ म्ह स्वस्थ दातातय्गु औसत + एसईएम प्रतिनिधित्व याइ । म्ह्व निं n = ३ स्वतन्त्र प्रयोगया तथ्यांकया प्रतिनिधित्व याइ । (B to D) CD3/CD28 व IL-2 यात ७ न्हु तक्क थःथःगु MNA एकाग्रताय् टि सेलयात सक्रिय यायेत छ्यःगु ख। विश्लेषण याये न्ह्यः, कोषयात गोल्जिस्टप नापं पीएमए/आयोनोमाइसिनं ४ घौतक उत्तेजित यात । टि सेलय् टिएनएफα (बि) अभिव्यक्ति । जीवित कोषिकाय् TNFα अभिव्यक्तिया दसु किपा (खव) व टेबुलर डाटा (जव)। टि सेलय् आइएफएन-γ (सि) व आइएल-२ (डि) अभिव्यक्ति । साइटोकाइनया अभिव्यक्तियात फ्लो साइटोमेट्रीं दाना स्वल । बार ग्राफं औसत (n = ६ स्वस्थ दाता) + SEM प्रतिनिधित्व याइ। P मान निर्धारण यायेत भेरिएन्स व रिपिट मेजरया एकतर्फी विश्लेषण (*P<0.05 व **P<0.01) छ्यलादिसँ। म्ह्व निं n = ३ स्वतन्त्र प्रयोगया तथ्यांकया प्रतिनिधित्व याइ । (E to G) CD3/CD28 व IL-2 यात ७ न्हु तक्क थःथःगु MNA एकाग्रताय् टि सेलयात सक्रिय यायेत छ्यःगु ख। पिएमए/आयोनोमाइसिन स्टिमुलेशनया ४ घौ न्ह्यः व लिपा माध्यम मुंकल । टिएनएफα (इ), आइएफएन-γ (एफ) व आइएल-२ (जि)या एकाग्रता एलिसापाखें मापन याःगु खः । बार ग्राफं औसत (n = ५ स्वस्थ दाता) + SEM प्रतिनिधित्व याइ। भेरिएन्सया एकतर्फी विश्लेषण व दोहोरे जुइगु मापन (*P<0.05) छ्यला P मान निर्धारण याइ। बिन्दु दुगु लाइनं पत्ता लगे यायेगु सीमा क्यनी । (ज) सेल लाइसिस परीक्षण। FRα-CAR-T वा GFP-CAR-T कोषयात २४ घण्टाया निंतिं एडेनोसिन (२५०μM) वा MNA (१० mM) नापं समायोजन यानातःगु ख, वा उपचार मयासे त्वःता तःगु ख (Ctrl)। एसके-ओभि-३ कोषिकाया प्रतिशत स्याःगु दाना स्वल । वेल्च टि टेस्टं पि भ्यालु निर्धारण याइ (*पि<०.५ व **पि<०.०१)।
एमएनए-निर्भर टिएनएफα अभिव्यक्ति नियमनया यान्त्रिक थुइका कायेत एमएनए-उपचारित टि कोषया टिएनएफα एमआरएनएय् जुइगु हिउपाया मूल्यांकन याःगु ख (चित्र ५ ए)। एमएनएया वासः याःगु स्वस्थ दाता टि कोषय् टिएनएफα ट्रान्सक्रिप्सनया स्तर निगु गुणा अप्वःगु खनेदु, गुकिलिं एमएनए टिएनएफα ट्रान्सक्रिप्सनल रेगुलेसनय् निर्भर जुइगु संकेत बी। थ्व सम्भावित नियामक संयन्त्रया अनुसन्धान यायेत, निगु ज्ञात ट्रान्सक्रिप्सन कारक गुकिलिं TNFαयात नियन्त्रित याइ, अर्थात् सक्रिय टि सेल न्यूक्लियर कारक (NFAT) व विशिष्ट प्रोटिन १ (Sp1), प्रोक्सिमल TNFα प्रोमोटर ( 30 ) नाप MNA बाइन्डिङया प्रतिक्रियाय् मूल्यांकन याःगु ख। TNFα प्रोमोटरय् ६गु म्हसीकातःगु NFAT बाइन्दिङ साइट व २गु Sp1 बाइन्दिङ साइट दइ, गुकिलिं छगू साइटय् ओभरल्याप जुइ [५'cap निसें -५५ बेस पेयर (bp)] (३०)। क्रोमाटिन इम्युनोप्रेसिपिटेशन (चिप)ं क्यंगु दु कि एमएनए नापं वासः यायेबलय् एसपी १ या टिएनएफα प्रोमोटरय् बाइन्डिङ स्वंगु गुणा अप्वइ। एनएफएटीया समावेश नं अप्वल व महत्वया लिक्क थ्यन (चित्र ५ ख) । थ्व तथ्यांकं एमएनएं एसपी १ ट्रान्सक्रिप्सनया माध्यमं टिएनएफαया अभिव्यक्तियात नियन्त्रित याइगु व म्हो जक एनएफएटीया अभिव्यक्तियात नियन्त्रित याइगु संकेत बी।
(क) एमएनए मदयेक संस्कारित टि सेलया तुलनाय् एमएनए नापं वासः याःगु टि सेलय् टिएनएफα अभिव्यक्तिया गुणा हिउपाः। एसइएम नापं अभिव्यक्तिया स्वरुप क्यनातःगु दु (n = ५ स्वस्थ दाता)। म्ह्व निं n = ३ स्वतन्त्र प्रयोगया तथ्यांकया प्रतिनिधित्व याइ । (ख) एनएफएटी व एसपी १ धुंका ८ एमएम एमएनए नापं वा मदयेक वासः याःगु टि सेलया टिएनएफα प्रोमोटरयात (Ctrl) व पीएमए/आयोनोमाइसिन उत्तेजना नापं ४ घण्टाया निंतिं संयोजन यानातःगु ख। इम्युनोग्लोबुलिन जी (IgG) व H3 यात क्रमशः इम्युनोप्रेसिपिटेशनया निंतिं नेगेटिभ व पोजिटिभ कन्ट्रोलया रुपय् छ्यःगु ख। चिपया क्वांटिफिकेशनं क्यंगु दु कि एमएनए-उपचारित कोषय् एसपी १ व एनएफएटीया टिएनएफα प्रोमोटरय् बाइन्डिङ नियन्त्रणया तुलनाय् यक्व गुणा अप्वःगु खनेदु। म्ह्व निं n = ३ स्वतन्त्र प्रयोगया तथ्यांकया प्रतिनिधित्व याइ । पि भ्यालु मल्टिपल टि-टेस्टं निर्धारण याइ (*** पि <०.०१) (C) एचजीएससीया एसाइटिसया तुलनाय् टि सेल (नन-साइटोटक्सिक) ट्युमरय् टिएनएफया अभिव्यक्ति अप्वःगु खनेदु । उं थी थी ल्वगितय् गु प्रतिनिधित्व याइ । प्रदर्शित कोषयात ३०० तक रेन्डम नमूना काःगु दु व ओभरड्राइङयात सीमित यायेत जिटर यानातःगु दु (** Padj = 0.0076)। (डी) डिम्बाशय क्यान्सरया निंतिं एमएनएया प्रस्तावित मोडेल । एमएनए ट्यूमर सेलय् व टिएमइइ फाइब्रोब्लास्टय् उत्पादन जुइ अले टि सेलं काइ । एमएनए नं एसपी१या टिएनएफα प्रोमोटरय् बाइन्दिङ अप्वयेकिगु या, गुकिलिं टिएनएफα ट्रान्सक्रिप्सन व टिएनएफα साइटोकाइन उत्पादन अप्वइ। एमएनए नं आइएफएन-γ म्ह्व याइ । टि सेलया ज्यायात पनेवं स्यायेगु क्षमता म्ह्व जुइ व ट्यूमर याकनं बुयावइ ।
रिपोर्ट कथं टिएनएफαया फ्रन्ट व ब्याक-डिपेन्डेन्ट एन्टि-ट्युमर व एन्टि-ट्युमर इफेक्ट दु, तर ओभरिअन क्यान्सरया वृद्धि व मेटास्टेसिसयात प्रोत्साहन यायेत थुकिया नांजाःगु भूमिका दु (३१-३३)। रिपोर्ट कथं ओभेरियन क्यान्सर दुपिं ल्वगितय्के एसिटिस व ट्युमरया टिश्यूइ टिएनएफαया मात्रा बेनाइन टिश्यू स्वयां अप्वः जुइ (३४–३६) । संयन्त्रया ल्याखं टिएनएफαं ह्याउँगु हि कोषया सक्रियता, ज्या व प्रसारयात नियन्त्रित यायेफु, व क्यान्सर कोषया फेनोटाइप हिलेफु (३७, ३८)। थ्व निष्कर्ष नापं मेल खनिगु, डिफरेन्सियल जीन एक्सप्रेसन विश्लेषणं क्यंगु दु कि ट्युमर टिस्यूइ टि सेलय् एसाइटिसया तुलनाय् टिएनएफ उल्लेखनीय रुपं अप-रेगुलेट जुल (चित्र ५सी)। टिएनएफ अभिव्यक्तिइ वृद्धि गैर-साइटोटक्सिक फेनोटाइप दूगु टि सेल जनसंख्याय् जक्क खने दु (चित्र S5A)। सारांशय्, थ्व तथ्यांकं एमएनएया एचजीएससीइ डुअल इम्युनोसप्रेसिभ व ट्युमर प्रोमोटिङ प्रभाव दु धइगु धारणायात समर्थन याइ।
फ्लो साइटोमेट्रीइ आधारित फ्लोरोसेन्ट लेबलिङ्ग टिआइएल मेटाबोलिज्मया अध्ययन यायेगु मू विधि जुयाच्वंगु दु । थ्व अध्ययनं क्यंगु दु कि सेकेन्डरी लिम्फोइद अंगया पेरिफेरल हि लिम्फोसाइट वा टि सेलया तुलनाय् म्युरिन व मनुया टिएलय् ग्लुकोज अपतेक यायेगु प्रवृत्ति अप्व जुइ (४, ३९) व माइटोकन्ड्रियाया ज्या क्रमिक रुपं म्हो जुइगु (१९, ४०)। थ्व अध्ययनय् झीसं थन्यागु हे लिच्वः खनागु दुसां मू विकास धइगु छगू हे रिसेक्टेड ट्युमर टिस्यूपाखें ट्युमर सेल व टिआईएलया मेटाबोलिज्मया तुलना यायेगु खः । थ्व छुं न्हापाया रिपोर्टनाप मेल खनिगु कथं, एसाइटिस व ट्युमरं वःगु ट्युमर (CD45-EpCAM +) कोषय् CD8 + व CD4 + T कोष स्वया अप्व ग्लुकोज अपतेक जुइ, गुकिलिं ट्युमर कोषया अप्व ग्लुकोज अपतेकयात T कोषनाप तुलना यायेछिं धकाः समर्थन याइ। टि सेल धें धें बल्लाःया अवधारणा । टिएमइ । तर ट्युमर कोषया माइटोकन्ड्रियाल सक्रियता सीडी८ + टी कोष स्वया अप्व जुइ तर माइटोकन्ड्रियाल सक्रियता सीडी४ + टी कोषया थें हे जुइ। थ्व लिच्वःतेसं ट्युमर कोषया निंतिं अक्सिडेटिभ मेटाबोलिज्म महत्वपूर्ण ख धइगु उदयमान विषययात पुष्टि याइ (४१, ४२)। थ्व नं इमिसं सुझाव बियादिल कि सीडी८ + टी कोष सीडी४ + टी कोष स्वया अक्सिडेटिभ डिसफंक्सनया निंतिं अप्व संवेदनशील जुइफु, वा सीडी४ + टी कोषं माइटोकन्ड्रियाया सक्रियता कायम यायेत ग्लुकोज बाहेक मेमेगु कार्बन स्रोत छ्येलेफु (४३, ४४)। थुकी लुमंकेबहःजू, जिमिसं एसिटिइ सीडी ४ + टि इफेक्टर, टि इफेक्टर मेमोरी व टि सेन्ट्रल मेमोरी सेल दथुइ ग्लुकोज अपतेक वा माइटोकन्ड्रियाल एक्टिभिटीइ छुं नं भिन्नता मखना । अथे हे ट्युमरय् सीडी८ + टी कोषया विभेदन अवस्थाया ग्लुकोज अपतेकय् जुइगु हिउपाःलिसे छुं स्वापू मदु, गुकिलिं इन भिट्रोय् कल्चर यानातःगु टि कोष व इन भिभोय् मनुया टिआइएल दथुइ महत्त्वपूर्ण अन्तरयात उजागर याइ (२२)। थ्व अवलोकनयात निष्पक्ष स्वचालित कोष जनसंख्या वितरणया छ्येलेज्यां नं पुष्टि याःगु ख, गुकिलिं ट्युमर कोष स्वया अप्व ग्लुकोज अपतेक व माइटोकन्ड्रियाल सक्रियता दूगु सीडी४५ + / सीडी३- / सीडी४ + / सीडी४५आरओ + कोष प्रचलित दु तर मेटाबोलिक सक्रिय कोष जनसंख्या दूगु खँयात अझ लुइकल। थ्व जनसंख्यां scRNA-seq विश्लेषणय् म्हसीकातःगु माइलोइद सप्रेसर सेल वा प्लाज्मासाइतोइद डेन्ड्रिटिक सेलया पुटेटिभ सबपोपुलेसनया प्रतिनिधित्व यायेफु। थ्व निगुलिं मनुया डिम्बाशयया ट्युमरय् रिपोर्ट जूगु दुसां [४५], इमित अझ नं थप ज्या यायेमाःगु दु थ्व माइलोइद उपजनसंख्याया वर्णन यायेगु ख।
फ्लो साइटोमेट्री-आधारित विधिं कोष प्रकार दथुइ ग्लुकोज व अक्सिडेटिभ मेटाबोलिज्मया सामान्य भिन्नता स्पष्ट यायेफुसां टिएमईइ माइटोकन्ड्रियाल मेटाबोलिज्मया निंतिं ग्लुकोज वा मेमेगु कार्बन स्रोतं उत्पादित जुइगु सटीक मेटाबोलाइट आःतक्क निर्धारण मजूनि। छुं टिआइएल उपसमूहय् मेटाबोलाइटया उपस्थिति वा अनुपस्थिति निर्धारण यायेत एक्साइज्ड टिस्यूपाखें कोष जनसंख्याया शुद्धिकरण यायेमाः। अतः, मास स्पेक्ट्रोमेट्री नापं झीगु सेल इन्रिचमेन्ट विधिं टि सेल व ट्युमर सेल जनसंख्याय् भिन्न रुपं समृद्ध जुइगु मेटाबोलाइटया अन्तर्दृष्टि बीफु गुकिलिं ल्वगिया नमूना मिले यायेगु ज्याय् जुइ। थ्व विधिया फ्लोरोसेन्स-एक्टिभेटेड सेल सर्टिङ स्वया फाइदा दुसां छुं मेटाबोलाइट लाइब्रेरीइ अन्तर्निहित स्थिरता व/वा द्रुत टर्नओभर दरया कारणं प्रभावित जुइफु (२२)। अथे जुसां जिमिगु विधिं निगु मान्यता प्राप्त इम्युनोसप्रेसिभ मेटाबोलाइट एडेनोसिन व काइनुरेनिन म्हसीकेत ताःलात, छाय् धाःसा थ्व नमूना प्रकारया दथुइ यक्व भिन्नता दु।
ट्युमर व टिआइएल सबटाइपया झीगु मेटाबोनोमिक विश्लेषणं ओभरिअन टिएमइइ मेटाबोलाइटया भूमिकाया बारेय् अप्व अन्तर्दृष्टि बी। न्हापां फ्लो साइटोमेट्री छ्यला जिमिसं ट्युमर व सीडी४ + टी सेल दथुइ माइटोकन्ड्रियाल एक्टिभिटीइ छुं नं भिन्नता मदु धकाः निर्धारण याना । अथे जुसां एलसी-एमएस/एमएस विश्लेषणं थ्व जनसंख्या दथुइ मेटाबोलाइटया प्रचुरताय् महत्त्वपूर्ण हिउपा खने दु, गुकिलिं टिआईएल मेटाबोलिज्म व थुकिया समग्र मेटाबोलिक गतिविधिया बारेय् निष्कर्ष पिकायेत सावधानीपूर्वक व्याख्या यायेमाःगु संकेत बी। निगूगु, एमएनए ट्युमरय् मखु, एसिटिइ सीडी४५-सेल व टि सेल दथुइ दकलय् अप्व अन्तर दूगु मेटाबोलाइट ख। अतः, कम्पार्टमेन्टलाइजेसन व ट्युमरया थासं टिआइएल मेटाबोलिज्मय् थी-थी प्रभाव लाकेफु, गुकिलिं छगू निश्चित सूक्ष्म वातावरणय् सम्भावित विषमतायात उजागर याइ। स्वंगु, एमएनए-उत्पादक एन्जाइम एनएनएमटीया अभिव्यक्ति मू कथं सीएएफय् सीमित जुइ, गुकिलि म्हो हद तक्क ट्युमर कोष ख, तर ट्युमर-निष्पन्न टि कोषय् डिटेक्टेबल एमएनए स्तर खनेदु। ओभरिअन सीएएफय् एनएनएमटीया ओभरएक्सप्रेसनया क्यान्सर-प्रवर्द्धन याइगु ज्ञात प्रभाव दु, गुकिया आंशिक कारण सीएएफ मेटाबोलिज्म, ट्युमर इन्भेसन व मेटास्टेसिसया प्रोमोटर जुइ (२७)। टिआइएलया समग्र स्तर मध्यम जूसां सीएएफय् एनएनएमटीया अभिव्यक्ति क्यान्सर जीनोम एटलस (टीसीजीए) मेसेन्चाइमल सबटाइपनाप तच्वकं स्वापू दु, गुकिलिं कमजोर प्रोग्नोसिस नाप स्वापू दु (२७, ४६, ४७)। अन्तय्, एमएनए अपघटनया निंतिं जिम्मेवार एन्जाइम एओएक्स१या अभिव्यक्ति नं सीएएफ जनसंख्याय् सीमित जुइ, गुकिलिं टि सेलय् एमएनए मेटाबोलाइज यायेगु क्षमता मदुगु संकेत बी। थ्व लिच्वःतेसं थ्व बिचाःयात समर्थन याइ कि थ्व लूयात प्रमाणित यायेत थप ज्या यायेमाःगु जूसां टि सेलय् एमएनएया उच्च स्तरं इम्युनोसप्रेसिभ सीएएफ माइक्रोइन्भाइरोमेन्टया उपस्थितिया संकेत बीफु।
एमएनए ट्रान्सपोर्टरया म्हो अभिव्यक्ति स्तर व एमएनए मेटाबोलिज्मय् संलग्न मू प्रोटिनया अनिर्णय स्तरयात स्वया टि सेलय् एमएनएया उपस्थिति अप्रत्याशित ख। न एनएनएमटी न एओएक्स१ scRNA-seq विश्लेषण व निगु स्वतन्त्र कोहोर्टया लक्षित qPCR पाखें लुइके मफुत। थ्व लिच्वःतसें एमएनएयात टि सेलं संश्लेषण याइमखु, तर वरपरया टिएमइपाखें सोसे याइ धकाः क्यनी । इन भिट्रो प्रयोगं टि सेलं एक्सोजेनस एमएनए मुंकेगु प्रवृत्ति दु धकाः क्यनी ।
झीगु इन भिट्रो अध्ययनं क्यंगु दु कि एक्सोजेनस एमएनए टि सेलय् टिएनएफαया अभिव्यक्तियात प्रेरित याइ व टिएनएफα प्रोमोटरय् एसपी१या बाइन्डिङ अप्वयेकी। टिएनएफαया एन्टि-ट्युमर व एन्टि-ट्युमर निगुलिं ज्या दुसां ओभरियन क्यान्सरय् टिएनएफαं ओभरियन क्यान्सरया वृद्धियात प्रोत्साहन बीफु (३१-३३)। ओभरिअन ट्युमर सेल कल्चरय् TNFαया न्यूट्रलाइजेशन वा माउस मोडेलय् TNFα सिग्नलया उन्मूलन TNFα-मध्यस्थता इन्फ्लेमेटरी साइटोकाइन उत्पादनय् सुधार जुइफु व ट्युमरया वृद्धियात पनेफु (३२, ३५)। अतः, थ्व अवस्थाय् टिएमई-निष्पन्न एमएनए अटोक्राइन लूपया माध्यमं टिएनएफα-निर्भर संयन्त्रया माध्यमं प्रो-इन्फ्लेमेटरी मेटाबोलाइटया रुपय् ज्या यायेफु, गुकिलिं डिम्बाशय क्यान्सरया घटना व प्रसारयात प्रोत्साहन बी (३१)। थ्व सम्भावनाया आधारय् टिएनएफα नाकाबन्दीयात डिम्बाशय क्यान्सरया सम्भावित चिकित्सीय एजेन्तया रुपय् अध्ययन यानाच्वंगु दु (३७, ४८, ४९)। थ्व नापं, एमएनए नं सीएआर-टी कोषया ओभरिअन ट्युमर कोषय् साइटोटक्सिसिटीयात बाधित याइ, गुकिलिं एमएनए-मध्यस्थता प्रतिरक्षा दमनया निंतिं थप प्रमाण प्रदान याइ। सामूहिक रुपं थ्व लिच्वःतेसं छगू मोडेलया सुझाव बी गुकिलि ट्युमर व सीएएफ कोषं एमएनएयात एक्स्ट्रासेल्युलर टिएमइइ पिकाइ। (i) टिएनएफ-प्रेरित डिम्बाशय क्यान्सर वृद्धि उत्तेजना व (ii) एमएनए-प्रेरित टि सेल साइटोटक्सिक गतिविधि निरोधया माध्यमं थ्व द्वैध ट्युमर प्रभाव जुइफु (चित्र ५डी)।
निष्कर्षय्, तीव्र कोष संवर्धन, एकल-कोष अनुक्रमण व मेटाबोलिक प्रोफाइलिङया संयोजन लागू याना थ्व अध्ययनं एचजीएससी ल्वगितेगु ट्युमर व एसिटिस कोष दथुइ तःधंगु इम्युनोमेटाबोलोमिक भिन्नता लुइकल। थ्व व्यापक विश्लेषणं टि कोष दथुइ ग्लुकोज अपतेक व माइटोकन्ड्रियाल सक्रियताय् भिन्नता दूगु क्यंगु दु, व एमएनएयात गैर-कोष स्वायत्त प्रतिरक्षा नियामक मेटाबोलाइटया रुपय् म्हसीकल। मनूया क्यान्सरय् टिएमइं टि सेल मेटाबोलिज्मयात गुकथं लिच्वः लाकी धइगु खँय् थुगु तथ्यांकं लिच्वः लाकी । टि सेल व क्यान्सर सेल दथुइ पोषक तत्वया निंतिं प्रत्यक्ष प्रतिस्पर्धा जुइगु रिपोर्ट जूसां मेटाबोलाइटं ट्युमरया प्रगतियात प्रोत्साहन बीत व सम्भवतः इन्दोजेनस इम्युन रेस्पोन्सयात दमन यायेत अप्रत्यक्ष नियामकया रुपय् नं ज्या यायेफु। थ्व नियामक मेटाबोलाइटया क्रियाशील भूमिकाया थप विवरणं एन्टि-ट्युमर इम्युन रेस्पोन्स अप्वयेकेगु वैकल्पिक रणनीतित चायेकेफु।
क्यानाडाया टिस्यू रिपोजिटरी नेटवर्कं प्रमाणित याःगु बीसी क्यान्सर ट्युमर टिस्यू रिपोजिटरीपाखें विरामीया नमूना व क्लिनिकल तथ्यांक प्राप्त याःगु खः । बीसी क्यान्सर अनुसन्धान नैतिकता समिति व ब्रिटिश कोलम्बिया विश्वविद्यालयं स्वीकृत याःगु प्रोटोकल (एच०७–००४६३) कथं फुक्क विरामीया नमूना व क्लिनिकल तथ्यांकं सूचित लिखित सहमति प्राप्त याःगु वा औपचारिक रुपं सहमति माफ याःगु दु । नमूनायात प्रमाणित बायोबैंकय् (बिआरसि-००२९०) तयातःगु दु । ल्वगिया पूवंक विशेषता तालिका एस १ व एस ५ स क्यनातःगु दु । क्रायोप्रिजर्भेसनया निंतिं स्क्याल्पेल छ्यला ल्वगिया ट्युमरया नमूनायात यान्त्रिक रुपं अपघटन याइ व अनंलि १०० माइक्रोन फिल्टरं थुकियात पुश यानाः छगू हे सेल सस्पेन्सन प्राप्त याइ । ल्वगिया एसाइटिसयात १५०० आरपीएमय् १० मिनेट ४ डिग्री सेल्सियसय् सेन्ट्रिफ्युज यानाः कोषयात पेलेट यानाः सुपरनेटेन्त लिकायेगु ज्या याःगु खः । ट्युमर व एसिटिसं प्राप्त कोषयात ५०% हिट-इनएक्टिभेटेड ह्युमन एबी सीरम (सिग्मा-एल्ड्रिच), ४०% आरपीएमआई-१६४० (थर्मो फिशर साइन्टिफिक) व १०% डाइमेथाइल सल्फोक्साइडय् क्रायोप्रिजर्भ यानातःगु ख। थ्व संरक्षित एकल कोष निलम्बनयात गलाः क्वय् वर्णन यानातःगु मेटाबोलोमिक्स व मेटाबोलाइट निर्धारणया निंतिं छ्येलातःगु ख।
पूवंगु माध्यमय् ०.२२ μm फिल्टर यानातःगु ५०:५० पूरक RPMI १६४०: AimV दइ। आरपीएमआई १६४० + २.०५ एमएम एल-ग्लुटामिन (थर्मो फिशर साइन्टिफिक) १०% ताप-निष्क्रिय मानव एबी सीरम (सिग्मा-एल्ड्रिच), १२.५ एमएम हेपेस (थर्मो फिशर साइन्टिफिक), २ एमएम एल-ग्लुटामिन (थर्फिक्सी साइन्टिफिक), फिशर एक्स१इल्लिन (थर्मो फिसर साइन्टिफिक) नापं पूरक स्ट्रेप्टोमाइसिन (पेनस्ट्रेप) समाधान (थर्मो फिशर वैज्ञानिक) व ५० μMB-मर्क्याप्टोइथेनॉल। AimV (इन्भिट्रोजन) २० एमएम हेपेस (थर्मो फिशर साइन्टिफिक) व २ एमएम एल-ग्लुटामिन (थर्मो फिशर साइन्टिफिक) नापं पूरक जुइ। फ्लो साइटोमिटर स्टेनिङ बफरय् ०.२२μm फिल्टर यानातःगु फस्फेट बफर सेलाइन (PBS; इन्भिट्रोजेन) ३% हिट-इनएक्टिभेटेड एबी ह्युमन सीरम (सिग्मा)या पूरक तयातःगु दु। सेल इन्रिचमेन्ट बफर ०.२२μm फिल्टर यानातःगु पीबीएसं दयेकिगु या व ०.५% हिट-इनएक्टिभेटेड ह्युमन एबी सीरम (सिग्मा-एल्ड्रिच)या पूरक जुइ।
३७°C पूर्ण माध्यमय् कोषयात १० nM MT DR व १०० μM २-NBDG ३० मिनेटया निंतिं दाग तःगु ख। थ्व धुंका कोषयात ४° सेल्सियसय् १५ मिनेटया निंतिं भाइबिलिटी डाई eF506 तया दाग तःगु ख। एफसी ब्लक (ईबायोसाइन्स) व ब्रिलियन्ट स्टेन बफर (बीडी बायोसाइन्स)य् कोषयात हाकनं सस्पेन्ड यानाः फ्लो साइटोमिटर स्टेनिङ बफरय् (निर्माताया निर्देशन कथं) पातला यानाः कोथाया तापक्रमय् १० मिनेट इन्क्युबेट यानादिसँ। ४°Cय् २० मिनेटया निंतिं फ्लो साइटोमेट्री स्टेनिङ बफरय् एन्टिबडीया छगू सेट (तालिका S2) तयाः कोषयात दाग तयादिसँ। विश्लेषण याये न्ह्यः फ्लो साइटोमेट्री स्टेनिङ बफर (साइटेक अरोरा; ३एल-१६भि-१४बी-८आर कन्फिगरेसन)य् कोषयात हाकनं सस्पेन्ड या। सेल काउन्ट डाटा विश्लेषण यायेत स्पेक्ट्रोफ्लो व फ्लोजो भि १० छ्यलादिसँ, अले डाटा दयेकेगु निंतिं ग्राफप्याड प्रिज्म ८ छ्यलादिसँ । २-एनबीडीजी व एमटी डीआरया मेदियान फ्लोरोसेन्स इन्टेन्सिटी (एमएफआई)यात लग-नर्मलाइज यानातःगु ख, व अनंलि मेल जूपिं ल्वगितेगु हिसाब यायेत तथ्यांकीय विश्लेषणया निंतिं पेयर टि परीक्षण छ्यःगु ख। ४० स्वयां म्ह्व घटना दुगु फुक्क जनसंख्यायात विश्लेषणं लिकायेगु; तथ्यांकीय विश्लेषण व डाटा भिजुअलाइजेशन याये न्ह्यः छुं नं नकारात्मक मूल्यया निंतिं १ या एमएफआई मूल्य दुथ्याकि ।
माथिया प्रक्रिया प्यानलया म्यानुअल गेटिङ रणनीतियात पूरक यायेत जिमिसं फ्लोजोय् सीपिं कोषयात मदयेकेधुंकाः जनसंख्याय् कोषयात स्वतः असाइन यायेत आकार प्रतिबन्ध वृक्ष (FAUST) (२१)पाखें पूर्ण एनोटेशन छ्यलागु खः । जिमिसं म्यानुअली आउटपुटयात मिसलोकट जूगु खनेदुगु जनसंख्यायात (पीडी १+यात पीडी १-ट्युमर कोषलिसे स्वानाः) व रिटेन जनसंख्यायात मर्ज यायेत व्यवस्थापन यानाच्वना । प्रत्येक नमूनाय् मुक्कं ११ जनसंख्याया निंतिं औसतन २% स्वयां अप्वः कोषिका दइ ।
ल्युकोसाइट पृथक्करण उत्पाद (STEMCELL टेक्नोलोजीज) स्वया पीबीएमसीयात अलग यायेत फिकोल ग्रेडिएन्त डेन्सिटी सेन्ट्रिफ्युगेसन छ्यःगु ख। सीडी८ + टी सेलयात सीडी८ माइक्रोबिड्स (मिल्टेन्यी) छ्यला पीबीएमसीं अलग यानाः निर्माताया निर्देशन कथं २ वाःया निंतिं ट्रान्सएक्ट (मिल्टेन्यी) छ्यला पूर्ण माध्यमय् विस्तार याःगु खः । कोषयात IL-7 (१० ng/ml; PeproTech) दूगु पूर्ण माध्यमय् ५ न्हु तक्क दनेगु याइ, व लिपा ट्रान्सएक्टं हाकनं उत्तेजित याइ। ७ न्हुया दिं निर्माताया निर्देशन कथं लगातार स्वंगू राउण्डय् कोषयात समृद्ध यायेत ह्युमन सीडी४५ माइक्रोबिड्स (मिल्टेन्यी) छ्यःगु खः । फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषणया निंतिं कोषयात एलिकोट यानातःगु ख (थ्व क्वय् वर्णन यानातःगु कथं), व एलसी-एमएस/एमएस विश्लेषणया निंतिं १० लाख कोषयात स्वकः एलिकोट यानातःगु ख। क्वय् न्ह्यथनातःकथं नमूनायात एलसि-एमएस/एमएसं प्रशोधन यात । जिमिसं १,००० आयन ल्याः तनाच्वंगु मेटाबोलाइटया मू अनुमान याना । प्रत्येक नमूनायात कुल आयन ल्याखं (TIC) सामान्यीकरण याइ, लघुगणकीय रुपय् हिला विश्लेषण याये न्ह्यः मेटाबोएनालिस्टआरय् स्वतः सामान्यीकरण याइ।
प्रत्येक ल्वगिया सिंगल सेल सस्पेन्सनयात गलाः ४० μm फिल्टरया माध्यमं पूर्ण माध्यमय् (थ्व क्वय् वर्णन यानातःकथं) फिल्टर यानाः । निर्माताया प्रोटोकल कथं माइक्रोबिड्स (मिल्टेन्यी) छ्यला चुम्बकीय मणि पृथक्करण यानाः लगातार स्वक्वः चरणया सकारात्मक चयन यानाः सीडी८+, सीडी४+ व सीडी४५- कोष (हिमय्)या निंतिं नमूना समृद्ध याःगु खः । संक्षेपय्, कोषयात कोष समृद्धि बफरय् (थ्व क्वय् वर्णन यानातःगु कथं) हाकनं सस्पेन्ड याइ व ल्याः खाइ। कोषयात मनुया सीडी८ बिड्स, ह्युमन सीडी४ बिड्स वा ह्युमन सीडी४५ बिड्स (मिल्तेनी) नाप १५ मिनेट तक्क इन्क्युबेट याना सेल इन्रिचमेन्ट बफरं धुनाबिल। नमूना एलएस स्तम्भ (मिल्तेनी) जुया छ्वइ, व सकारात्मक व नकारात्मक अंश संकलन याइ। अवधि म्हो यायेत व कोष रिकभरी स्टेपयात अप्वयेकेत, अनंलि सीडी८-फ्राक्सनयात सीडी४+ संवर्धनया निक्वःगु चरणया निंतिं छ्येलिगु या, व सीडी४-फ्राक्सनयात लिपाया सीडी४५-संवर्धनया निंतिं छ्येलिगु या। अलग यायेगु प्रक्रियाय् समाधानयात बरफय् ति ।
मेटाबोलाइट विश्लेषणया निंतिं नमूना तयार यायेत कोषयात छक्वः हिम-चिकुगु चिकंया द्रावणं हिला, व प्रत्येक नमूनाय् १ एमएल ८०% मेथनोल तया, अनंलि भर्टेक्स याना तरल नाइट्रोजनय् स्न्याप फ्रोजन याना। नमूनायात स्वकः फ्रिज-थाउ चक्रय् तयाः १४,००० आरपीएमय् १५ मिनेटया निंतिं ४ डिग्री सेल्सियसय् सेन्ट्रिफ्युज याःगु खः । मेटाबोलाइट दुगु सुपरनेटेन्त गंके मफुतले बाष्पीकरण जुइ । मेटाबोलाइटयात ५० μl ०.०३% फर्मिक एसिडय् हाकनं घुलनशील याना भर्टेक्स याना मिक्स याना सेन्ट्रिफ्युज याना मलमूत्र लिकायेगु या।
च्वय् न्ह्यथनातःकथं मेटाबोलाइट पिका । मेटाबोलोमिक्स अनुसन्धानया निंतिं सुपरनेटेन्तयात उच्च प्रदर्शनया तरल पदार्थ क्रोमेटोग्राफी सिसिइ स्थानान्तरण या । ब्याच इफेक्टयात पनेगु निंतिं प्रत्येक नमूनायात उतिग्यंगु ल्याखय् कोषिकां वासः यायेत छगू आकस्मिक उपचार प्रोटोकल छ्यलादिसँ । जिमिसं एबी साइइएक्स क्यूट्राप ५५०० ट्रिपल क्वाड्रुपोल मास स्पेक्ट्रोमिटर (५०)य् न्हापा प्रकाशित जूगु ग्लोबल मेटाबोलाइटया गुणात्मक मूल्यांकन यानागु खः । क्रोमेटोग्राफिक विश्लेषण व शिखर क्षेत्र एकीकरण मल्टिक्वान्ट भर्सन २.१ सफ्टवेयर (एप्लाइड बायोसिस्टम्स एससीआईईएक्स) छ्यला याःगु ख।
तनाच्वंगु मेटाबोलाइटया मू अनुमान यायेत १०००या आयन ल्याः छ्यःगु ख, व प्रत्येक नमूनाया टिआइसी छ्येलातःगु प्रत्येक लुयावःगु मेटाबोलाइटया सामान्यीकृत शिखर क्षेत्रफलया गणना यायेत नमूना प्रशोधनं इन्स्ट्रुमेन्टल एनालिसिसं न्ह्यथंगु हिउपाया निंतिं सुधार यायेत छ्यःगु ख। टिआइसी सामान्यीकरण जुइधुंका मेटाबोएनालिस्टआर(५१) (डिफल्ट प्यारामिटर) लॉगरिदमिक कन्भर्सन व अटोमेटिक नर्म लाइन स्केलिङया निंतिं छ्येलिगु या। जिमिसं नमूना प्रकार दथुइ मेटाबोलोमया भिन्नताया अन्वेषणात्मक विश्लेषण यायेत भेगन आर प्याकेज नापं पीसीए छ्यला, व ल्वगितेगु विश्लेषण यायेत आंशिक रिडन्डेन्सी विश्लेषण छ्यला। नमूनाया दथुइ युक्लिडियन दूरीयात क्लस्टर यायेत हिट म्याप डेन्ड्रोग्राम दयेकेत वार्ड विधि छ्यलादिसँ । जिमिसं लिम्मा (५२)यात मानकीकृत मेटाबोलाइट प्रचुरताय् छ्यला मुक्कं कोष प्रकार व सूक्ष्म वातावरणय् विभेदक प्रचुरता मेटाबोलाइटया पहिचान याना। व्याख्यायात सरल यायेत झीसं मोडेल निर्दिष्ट यायेत ग्रुप मीन प्यारामिटर छ्यला, व माइक्रोइन्भाइरोमेन्टय् सेल प्रकारयात प्रत्येक ग्रुप (n = ६ ग्रुप)या रुपय् कायेगु या; सिग्निफिकेन्स टेस्टया निंतिं जिमिसं प्रत्येक मेटाबोलाइटया निंतिं स्वकः बारम्बार मापन यानागु मखुगु प्रतिकृति मजुइकेत लिम्मा डिजाइनय् ल्वगियात पंगःया रुपय् दुथ्याकागु खः । थीथी ल्वगितय् दथुइ मेटाबोलाइटया अन्तर जाँच यायेत जिमिसं ल्वगियात दुथ्याकाः लिम्मा मोडेलयात छगू निश्चित कथं समायोजन यानागु खः । जिमिसं कोष प्रकार व Padj <0.05 (बेन्जामिनी-होचबर्ग सुधार)या सूक्ष्म वातावरण दथुइ पूर्व निर्दिष्ट विपरीतताया महत्त्व रिपोर्ट याना।
मिल्तेनी डेड सेल रिमूभल किट (>८०% व्यवहार्यता) छ्यला विगोर इन्रिचमेन्ट यायेधुंका १०x ५′जीन एक्सप्रेसन प्रोटोकल छ्यला कुल लाइभ फ्रोजन एसाइटिस व ट्युमरया नमूनाय् सिंगल-सेल ट्रान्सक्रिप्टोम सिक्वेन्सिङ याःगु ख। छगू ट्युमरया नमूनापाखें म्हो व्यवहार्यतां थुकियात दुथ्याकेगु ज्या मयाःगु जूसां मेल खनीगु ट्युमर व एसाइटिस दूगु प्यम्ह केसया विश्लेषण याःगु खः । विरामीया मल्टिपल सेलेक्सन प्राप्त यायेत जिमिसं १०x क्रोमियम कन्ट्रोलरया लेनय् प्रत्येक विरामीया नमूनायात संयोजन याना, व एसाइटिस व ट्युमर साइटया ब्यागलं ब्यागलं विश्लेषण याना। अनुक्रमण धुंका [इलुमिना हाइसेक ४००० २८×९८ बीपी पेयर एन्ड (पीई), क्युबेक जीनोम; ट्यूमर व एसाइटिसया निंतिं क्रमशः ७३,४८८ व ४१,३७८ प्रति कोषया औसत ब्वनेगु]], जिमिसं सेलएसएनपी व भिरेओ (५३) छ्यला (सेलएसएनपीया आधारय् GRCh38 पाखें बियातःगु सामान्य मानव SNP (VCF)यात छगू दाता पहिचान स्थिति बियातःगु दु । (IBS), डुप्लेक्सया रुपय् म्हसीकातःगु अनसाइन्ड कोष व एसिट व ट्यूमरया नमूना दथुइ मेल जूगु कोषयात त्वःताः (५४) थ्व ज्याया आधारय् जिमिसं ट्यूमर व एसिटिइ प्रचुर मात्राय् कोष प्रतिनिधित्व दुगु स्वंगू केसयात डाउनस्ट्रिम विश्लेषणया निंतिं तयातया (BiCo) ६९७५ कोष (क्रमशः ट्यूमर व एसाइटिसपाखें २७९२ व ४१८३ कोष) विश्लेषणया निंतिं झीसं आइग्राफया (५७) लुभेन क्लस्टरिङया साझा जीन निकटतम छिमेकी नेटवर्क (एसएनएन)या आधारय् ज्याकार्ड दूरी क्लस्टर कोषयात अभिव्यक्तिपाखें मार्पुट annota य् छ्यलागु खः । व t-SNE नापं कल्पना यानातःगु साइटोटक्सिक टि कोषयात CD8A व GZMA या अभिव्यक्तिं परिभाषित याइ, कम राइबोसोमल प्रोटिन अभिव्यक्ति दूगु सबक्लस्टरयात त्वःताः जिमिसं इजार एट अल (16) या प्रकाशित तथ्यांकय् पहुँच याना, इमिगु t-SNE एम्बेडिंग सहित, इम्युन सेल ओभरल्यापयात नियन्त्रण यायेफु।
पीबीएमसीयात ल्युकोसाइट पृथक्करण उत्पाद (STEMCELL टेक्नोलोजीज) स्वया फिकोल ग्रेडिएन्त डेन्सिटी सेन्ट्रिफ्युगेसनं अलग याःगु ख। सिडि३ + कोषयात सिडि३ बिड्स (मिल्टेन्यी) छ्यलाः पिबिएमसिपाखें अलग याःगु खः । एमएनएया उपस्थिति वा अनुपस्थितिइ सीडी३+ कोषयात प्लेट-बाउन्द सीडी३ (५μg/ml), घुलनशील सीडी२८ (३μg/ml) व आईएल-२ (३०० U/ml; प्रोल्युकिन) नापं सक्रिय याइ। विस्तारया लिपांगु दिं फ्लो साइटोमेट्रीपाखें व्यवहार्यता (फिक्सेबल व्यवहार्यता डाई ईफ्लोर४५०, ईबायोसाइन्स) व प्रजनन (१२३काउन्ट ईबीड्स, थर्मो फिशर साइन्टिफिक)या मूल्यांकन याःगु खः । ४ घण्टाया निंतिं गोल्जिस्टपलिसे पीएमए (२० एनजी/एमएल) व आयनोमाइसिन (१μg/एमएल) नापं कोषयात उत्तेजित यानाः इफेक्टर फंक्शनया मूल्यांकन या, अले सीडी८-पर्सीपी (आरपीए-टी८, बायोलेजेन्ड), सीडी४-एएफ७०० (आरपीए-टी४) , बायोलेजेन्ड) व टीएनएफएसीओरेसिटेआइएनएफआईटीसीएनाया अनुगमन या । (एमएबि११, बिडि) क्यूपीसीआर व चिप कोषयात पीएमए (२० एनजी/एमएल) व आयोनोमाइसिन (१माइक्रोग्राम/एमएल) ४ घौतक उत्तेजित या। एलिसा सुपरनेटेन्तयात ४ घण्टाया निंतिं पीएमए (२० एनजी/एमएल) व आयोनोमाइसिन (१ μg/एमएल) तयाः उत्तेजना याये न्ह्यः व लिपा संकलन याःगु खः ।
आरएनइजि प्लस मिनि किट (क्यूआजेन) छ्यलाः आरएनए अलग यायेत उत्पादकया प्रोटोकल पालना या । नमूनायात होमोजेनाइज यायेत क्यूआइएस्रेडर (क्यूआइजेन) छ्य । पूरक डिएनए (सिडिएनए) संश्लेषण यायेत उच्च क्षमताया आरएनए टु सिडिएनए किट (थर्मो फिशर साइन्टिफिक) छ्यलादिसँ । टकम्यान रैपिड एडभान्स मास्टर मिक्स (थर्मो फिशर साइन्टिफिक) छ्यला जीन अभिव्यक्तिया परिमाण (निर्माताया प्रोटोकल कथं) क्वय् बियातःगु जाँचया ग्वाहालिं छ्यलादिसँ : एचएस००१९६२८७_एम१ (एनएनएमटी), एचएस००१५४०७९_एम१ (एओएक्स१), एचएस००१५४०७९_एम१ (एओएक्स१), एचएस००२४२१५ एचएस०२७८६६२४_जी१ [ग्लिसरलडिहाइड-३-फस्फेट अफ हाइड्रोजन (जीएपीडीएच)] व एचएस०१०१०७२६_एम१ (एसएलसी२२ए२)। माइक्रोएम्प फास्ट अप्टिकल ९६-वेल रिएक्सन प्लेट (एप्लाइड बायोसिस्टम)य् माइक्रोएम्प अप्टिकल फिल्मलिसें स्टेपवनप्लस रियल टाइम पीसीआर सिस्टम (एप्लाइड बायोसिस्टम) (एप्लाइड बायोसिस्टम)य् नमूना चले याःगु खः । ३५ स्वया अप्व जुइगु छुं नं Ct मानयात डिटेक्सन थ्रेसहोल्ड स्वया अप्व माने याइ व अनडिटेक्टेबल कथं चिं तइ।
न्हापां वर्णन यानातःकथं चिप या (५८) संक्षेपय् धायेगु खःसा कोषयात फर्मलडिहाइड (अन्तिम एकाग्रता १.४२%) तयाः १० मिनेटया निंतिं कोथाया तापक्रमय् इन्क्यूबेट यानातःगु खः । १० मिनेटया निंतिं च्वापुइ सप्लिमेन्टेड स्वेलिङ बफर (२५ एमएम हेपेस, १.५ एमएम एमजीसीएल२, १० एमएम केसीएल व ०.१% एनपी-४०) छ्यलेगु, अनंलि वर्णन यानातःकथं इम्युनोप्रेसिपिटेशन बफरय् पुनःसस्पेन्ड यायेगु (५८ )। अनंलि नमूनायात क्वय् बियातःगु चक्रं सोनिकेशन याःगु ख: १० चक्र (२० १-सेकेण्डया पल्स) व ४० सेकेण्डया स्थिर ई। चिप-ग्रेड इम्युनोग्लोबुलिन जी (सेल सिग्नलिङ टेक्नोलोजी; १μl), हिस्टोन एच३ (सेल सिग्नलिङ टेक्नोलोजी; ३μl), एनएफएटी (इन्भिट्रोजन; ३μl) व एसपी१ (सेल सिग्नलिङ टेक्नोलोजी; ३μl) एन्टिबडीयात नमूना sha°CCnke. प्रोटिन ए बिड्स (थर्मो फिशर साइन्टिफिक)यात ४° सेल्सियसय् १ घण्टाया निंतिं हल्का हिलाः नमूनालिसे इन्क्यूबेट यायेगु, अनंलि चेलेक्स बिड्स (बायो-रेड) छ्यला डीएनएयात समृद्ध यायेगु, व प्रोटिनेज के (थर्मो फिशर) छ्यलेगु प्रोटिन पाचनया निंतिं । टिएनएफα प्रोमोटरयात पीसीआरं लुइकल: न्ह्यःने, जीजीजी टीएटी सीसीटी टीजीए टीजीसी टीटीजी टीजीटी; उकिया विपरीत, जीटीजी सीसीए एसीए एक्ट जीसीसी टीटीटी एटीए टीजी (२०७-बीपी उत्पादन)। इमेज ल्याब (बायो-रेड) पाखें किपात दयेकूगु खःसा इमेजजे सफ्टवेयर छ्यलाः क्वांटिफाइ याःगु खः ।
च्वय् न्ह्यथनातःकथं सेल कल्चर सुपरनेटेन्त मुंकल । थ्व निर्धारण निर्माताया प्रक्रिया कथं ह्युमन टिएनएफα एलिसा किट (इन्भिट्रोजेन), ह्युमन आइएल-२ एलिसा किट (इन्भिट्रोजेन) व ह्युमन आइएफएन-γ एलिसा किट (एबक्याम) याःगु खः । निर्माताया प्रोटोकल कथं सुपरनेतेन्तयात १:१०० पातला यानाः TNFα व IL-2 व १:३ य् IFN-γ लुइकेगु ज्या याःगु खः । ४५० एनएमय् एब्जर्बेन्स दाना स्वयेत एनभिजन २१०४ मल्टिलेबल रिडर (पर्किनएलमर) छ्यलादिसँ ।
पीबीएमसीयात ल्युकोसाइट पृथक्करण उत्पाद (STEMCELL टेक्नोलोजीज) स्वया फिकोल ग्रेडिएन्त डेन्सिटी सेन्ट्रिफ्युगेसनं अलग याःगु ख। सिडि३ + कोषयात सिडि३ बिड्स (मिल्टेन्यी) छ्यलाः पिबिएमसिपाखें अलग याःगु खः । एमएनएया उपस्थिति वा अनुपस्थितिइ सीडी३+ कोषयात प्लेट-बाउन्द सीडी३ (५μg/ml), घुलनशील सीडी२८ (३μg/ml) व आईएल-२ (३०० U/ml; प्रोल्युकिन) नापं ३ न्हु तक्क सक्रिय यानातःगु ख। ३ न्हु लिपा कोषिकात मुंकाः ०.९% सेलाइनं सिलेगु याइ, अले पेलेटयात स्न्याप फ्रोजन याइ । सेल काउन्ट १२३काउन्ट ईबीड्स छ्यला फ्लो साइटोमेट्री (साइटेक अरोरा; ३एल-१६भि-१४बी-८आर कन्फिगरेसन)या माध्यमं याःगु ख।
च्वय् न्ह्यथनातःकथं मेटाबोलाइट पिका । गंगु अर्कयात ४००० सेल इक्विभेलेन्ट/μl या एकाग्रताय् पुनर्गठन याःगु खः । रिभर्स-फेज क्रोमेटोग्राफी (१२९० इन्फिनिटी II, एजिलेन्ट टेक्नोलोजीज, सान्ता क्लारा, सीए) व कोर्टेक्स टि ३ कोलम (२.१×१५० मिमी, कण आकार १.६-μm, पोर आकार १२०-Å; #१८६००८५००)या माध्यमं नमूनाया विश्लेषण या। पोलार मास स्पेक्ट्रोमिटर (६४७०, एजिलेन्ट), गुकिलि इलेक्ट्रोस्प्रे आयनाइजेसन सकारात्मक मोडय् ज्या याइ। मोबाइल फेज ए ०.१% फर्मिक एसिड (एच२ओय्), मोबाइल फेज बी ९०% एसिटोनाइट्रिल, ०.१% फर्मिक एसिड ख। एलसी ग्रेडिएन्त १००% एया निंतिं ० निसें २ मिनेट, ९९% बीया निंतिं २ निसें ७.१ मिनेट, व ९९% बीया निंतिं ७.१ निसें ८ मिनेट जुइ, अनंलि ३ मिनेटया निंतिं ०.६ एमएल/मिनेटया प्रवाह दरय् मोबाइल फेज ए नापं स्तम्भयात हाकनं समतोल यायेमाः । । प्रवाह दर ०.४ एमएल/मिनेट खः, अले कोलुम च्याम्बरयात ५० डिग्री सेल्सियस तक तापयेकी । एमएनएया शुद्ध रासायनिक मानक (एम३२०९९५, टोरन्टो रिसर्च केमिकल कम्पनी, नर्थ योर्क, ओन्टारियो, क्यानाडा) छ्यला रिटेन्सन टाइम (आरटी) व रुपान्तरण (आरटी = ०.८८२ मिनेट, रुपान्तरण १ = १३७→९४.१, रुपान्तरण २ = १३७→९४.१, रुपान्तरण २ = १३७→भर्सन→३७) स्थापित या। स्वंगुलिं संक्रमण पाय् छिगु धारणा ईलय् जुइबलय् विशिष्टता सुनिश्चित यायेत संक्रमण १ यात परिमाणनया निंतिं छ्येलिगु या। एमएनए (टोरन्टो रिसर्च केमिकल कम्पनी)या स्ट्यान्डर्ड कर्भ स्टक सोलुसन (१ एमजी/एमएल)या ६ गू सिरियल ड्युल्युसन यानाः क्रमशः ०.१, १.०, १० व १०० एनजी/एमएल व १.० व १०μg/एमएल तरल पदार्थया स्ट्यान्डर्ड प्राप्त याःगु खः । पत्ता लगे यायेगु सीमा १ ng/ml ख, व रेखीय प्रतिक्रिया १० ng/ml व १०μg/ml दथुइ जुइ। निगु माइक्रोलिटर नमूना व मापदण्डया प्रत्येक इन्जेक्सन एलसी/एमएस विश्लेषणया निंतिं छ्यलिगु या, व विश्लेषण प्लेटफर्मया स्थिरता सुनिश्चित यायेत प्रत्येक ८ इन्जेक्सनय् छगू मिश्रित गुणस्तर नियन्त्रण नमूना चलेयाइ। दक्वं एमएनए-उपचारित कोष नमूनाया एमएनए प्रतिक्रिया परीक्षणया रेखीय दायरा दुने लाःगु खः । मासहन्टर क्वांटिटेटिभ एनालिसिस सफ्टवेयर (भि९.०, एजिलेन्ट) छ्यलाः डाटा विश्लेषण याःगु खः ।
निगूगु पुस्ताया αFR-CAR निर्माण सोङ एट अलपाखें काःगु खः । (५९) संक्षेपय् धायेगु खःसा थ्व निर्माणय् क्वय् बियातःगु सामग्री दु: सीडी८ए लीडर सिक्वन्स, ह्युमन αFR-विशिष्ट सिंगल-चेन भेरिएबल फ्र्याग्मेन्ट, सीडी८ए हिन्ज व ट्रान्समेम्ब्रेन क्षेत्र, सीडी२७ इन्ट्रासेल्युलर डोमेन व सीडी३जेड इन्ट्रासेल्युलर डोमेन। पूर्ण सीएआर अनुक्रमयात जेनस्क्रिप्टं संश्लेषण याःगु ख, व अनंलि ट्रान्सडक्सन दक्षताया मूल्यांकन यायेत छ्येलिगु जीएफपी एक्सप्रेसन क्यासेटया अपस्ट्रिमय् निगूगु पुस्ताया लेन्टिभाइरल एक्सप्रेसन भेक्टोरय् क्लोन याःगु ख।
लेन्टिभाइरस HEK293T कोषया ट्रान्सफेक्सनं दयेकिगु या [अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्सन (ATCC); डुलबेकोया परिमार्जित ईगल माध्यमय् १०% भ्रूण बोभाइन सीरम (एफबीएस) व १% पेनस्ट्रेप दूगु बुइकातःगु दु, व सीएआर-जीएफपी भेक्टोर व द प्याकेजिङ प्लाज्मिड (psPAX2 व pMD2.G, Addgene) छ्यला लिपोफेक्सन एमाइन (सिग्मा-एल्ड्रिच) छ्यलिगु या। भाइरस दूगु सुपरनेटेन्तयात ट्रान्सफेक्सनया ४८ व ७२ घौ लिपा संकलन यानाः फिल्टर यानाः अल्ट्रासेन्ट्रिफ्युगेसन यानाः कन्सेन्ट्रेट याःगु खः । ट्रान्सडक्सन मजूतले कन्सन्ट्रेटेड भाइरल सुपरनेटेन्तयात -८०°C स भण्डारण या ।
पीबीएमसीयात स्वस्थ दाता ल्युकोसाइट पृथक्करण उत्पाद (STEMCELL टेक्नोलोजीज) स्वया फिकोल ग्रेडिएन्त डेन्सिटी सेन्ट्रिफ्युगेसनं अलग याइ। पिबिएमसिपाखें सिडि८+ कोषयात अलग यायेत पोजिटिभ सेलेक्सन सिडि८ माइक्रोबिड्स (मिल्टेन्यी) छ्य । ट्रान्सएक्ट (मिल्टेन्यी) व टेक्सम्याक्स माध्यमय् [मिल्टेन्यी; ३% ताप-निष्क्रिय मानव सीरम, १% पेनस्ट्रेप व आईएल-२ (३०० यू/एमएल)] नापं पूरक। उत्तेजनाया नीप्यघौ लिपा टि सेलयात लेन्टिभाइरस (प्रति १०६ सेलय् १० μl कन्सेन्ट्रेटेड भाइरस सुपरनेतेन्त) नापं ट्रान्सड्युस याःगु ख। १ निसें ३ न्हु लिपा साइटेक अरोराय् ट्रान्सडक्सन जुइ (एफएससी (फर्वार्ड स्केटर)/एसएससी (साइड स्केटर), सिंगलेट, जीएफपी+य्), कोषया जीएफपी अभिव्यक्तिया मूल्यांकन यानाः कम्ती नं ३०% ट्रान्सडक्सन दक्षता क्यनेगु याइ ।
सीएआर-टी कोषयात २४ घण्टाया निंतिं इम्युनोकल्ट (स्टेमसेल टेक्नोलोजीज; १% पेनस्ट्रेपया पूरक)य् थुकथंया अवस्थाय् संस्कारित याःगु ख: उपचार मयाःगु, २५० μM एडेनोसिन वा १० एमएम एमएनएया उपचार यानातःगु। प्रिट्रीटमेन्ट धुंका सीएआर-टी कोषयात पीबीएसं हिला २०,००० एसके-ओभी-३ कोष [एटीसीसी; म्याककोइ ५ए माध्यमय् (सिग्मा-एल्ड्रिच) १०% एफबीएस व १% पेनस्ट्रेप १०य् पूरक: १या इफेक्टर टु टार्गेट रेसियोयात पूरक इम्युनोकल्ट माध्यमय् ट्रिप्लिकेटय् एम्प्लिफाइ यानातःगु ख। डिजिटलिस सापोनिन (०.५mg/ml; सिग्मा-एल्ड्रिच) नापं लाइज यानातःगु एसके-ओभी-३ कोष व एसके-ओभी-३ कोषयात क्रमशः नकारात्मक व सकारात्मक नियन्त्रणया रुपय् छ्यःगु ख। २४ घण्टा सह-खेती यायेधुंका सुपरनेटेन्त संकलन यानाः निर्माताया निर्देशन कथं ल्याक्टेट डिहाइड्रोजेनेज (एलडीएच) मापन याःगु खः (एलडीएच ग्लो साइटोटोक्सिसिटी एसे किट, प्रोमेगा) । एलडिएच सुपरनेटेन्तयात एलडिएच बफरय् १:५० पातिल यात । हत्याया प्रतिशत थुकथंया सूत्र छ्यला मापन याःगु खः : हत्याया प्रतिशत = सुधारया प्रतिशत / अधिकतम हत्याया दर x १००%, गन सुधारया प्रतिशत = सह-संस्कृति-टि कोष जक, व अधिकतम हत्याया दर = सकारात्मक नियन्त्रण-नकारात्मक नियन्त्रण ।
पाठ वा सामग्री व विधिइ वर्णन यानातःगु कथं तथ्यांक विश्लेषणया निंतिं ग्राफप्याड प्रिज्म ८, माइक्रोसफ्ट एक्सेल वा आर v3.6.0 छ्यलेगु या। यदि छम्ह हे ल्वगिं (दसु एसाइटिस व ट्युमर) यक्व नमूना संकलन यात धाःसा झीसं पेयर टि टेस्ट छ्यला वा ल्वगियात रेन्डम इफेक्टया रुपय् रेखीय वा सामान्यीकृत मोडेलय् उपयुक्त कथं दुथ्याका। मेटाबोलोमिक्स विश्लेषणया निंतिं, महत्व परीक्षण स्वक्वः तक याइ ।
थुगु च्वसुया निंतिं पूरक सामाग्रीया निंतिं, http://एडभान्सेस.साइन्सम्याग.ओर्ग/सिजिआइ/कन्टेन्ट/फुल/७/४/इएबि११७४/डिसि१ स्वयादिसँ ।
थ्व क्रिएटिभ कमन्स एट्रिब्युसन-गैर-व्यावसायिक लाइसेन्सया शर्त अन्तर्गत वितरण यानातःगु खुल्ला पहुँच च्वसु खः, गुकिं छुं नं माध्यमय् छ्यलेगु, वितरण यायेगु व पुनरुत्पादन यायेगु अनुमति बी, गुबले तक अन्तिम छ्यलाबुला व्यावसायिक लाभया निंतिं मखु व मूल कृति सही जुइगु आधार जुइ । भोंदां।
नोट : जिमिसं छितः छिगु इमेल एड्रेस बियादिसँ धकाः जक धायेगु यानाच्वना, गुकिं छिं पेजय् सिफारिस यानादीम्ह मनुखं छिं इमेल स्वयेगु इच्छा यानादीगु व स्पाम मखु धकाः सीके फइ । जिमिसं छुं नं इमेल एड्रेस काये मखु ।
छि आगन्तुक खः ला धकाः जाँच यायेत व स्वचालित स्पाम दुथ्याकेगु ज्यायात पनेगु निंतिं थुगु न्ह्यसः छ्यली ।
मारिसा के किलगौर (मारिसा के किलगौर), सारा मैकफर्सन (सारा मैकफर्सन), लॉरेन जी जकरियास (लॉरेन जी जकरियस), एबीगेल एरिस जी वाटसन (एच. वाटसन), जोन स्टैग (जोन स्टैग), ब्रैड एच. रसेल (जोन. रसेल), ब्रैड एच. (रसेल जी जोन्स), फिनिस टी हैमिल्टन (फिनिस टी.
एमएनए नं टि सेलया प्रतिरक्षा दमनय् योगदान बी व मनुया क्यान्सरया वासःया निंतिं सम्भावित इम्युनोथेरापी लक्ष्यया प्रतिनिधित्व याइ।
मारिसा के किलगौर (मारिसा के किलगौर), सारा मैकफर्सन (सारा मैकफर्सन), लॉरेन जी जकरियास (लॉरेन जी जकरियस), एबीगेल एरिस जी वाटसन (एच. वाटसन), जोन स्टैग (जोन स्टैग), ब्रैड एच. रसेल (जोन. रसेल), ब्रैड एच. (रसेल जी जोन्स), फिनिस टी हैमिल्टन (फिनिस टी.
एमएनए नं टि सेलया प्रतिरक्षा दमनय् योगदान बी व मनुया क्यान्सरया वासःया निंतिं सम्भावित इम्युनोथेरापी लक्ष्यया प्रतिनिधित्व याइ।
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